[发明专利]一种体外保存/培养卵母细胞以抑制卵母细胞生发泡破裂的方法

权利要求书

1.一种体外保存/培养卵母细胞的方法，其中，所述方法采用卵泡液作为卵母细胞体外保存/培养的保存液或培养液，以抑制卵母细胞生发泡破裂。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述抑制卵母细胞生发泡破裂的保存/培养温度为20-30℃，优选为27-28℃；

优选地，所述方法中每10～100μl卵泡液保存/培养1～10个卵母细胞；优选为每10μl卵泡液保存/培养1个卵母细胞。

3.如权利要求1或2中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括在用卵泡液保存/培养卵母细胞之前，用TCM-199培养液漂洗卵母细胞，并用卵泡液清洗卵母细胞的步骤。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述卵泡液选自猪或牛的卵泡液；

优选地，所述卵泡液选自猪的卵泡液；

更优选地，所述猪卵泡液的制备方法包括以下步骤：1)抽取猪卵泡液，自然沉降，取上清；2)离心，取上清；3)过滤除菌；优选地，步骤2)之后和步骤3)之前还包括将获得的上清液进行冻融、再次离心取上清；上清液优选在0℃～-20℃冻融，进一步优选在-20℃冻融；进一步优选地，进行冻融、再次离心取上清液的步骤可以根据实际情况重复，并将重复获得的上清液过滤除菌；

进一步优选地，所述猪卵泡液通过以下方法制备：1)选取直径为2-6mm的猪卵泡，抽取卵泡液，自然沉降15min，取上清；2)15000转/分钟离心15min，取上清，-20℃冻融后再15000转/分钟离心15min，再反复冻融离心两次，每次取上清，弃沉淀；3)收集上清，过滤除菌。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述卵母细胞选自哺乳动物中猪、小鼠、大鼠、兔的卵母细胞，优选为猪卵母细胞，更优选为生发泡期的猪卵母细胞。

6.权利要求1至5中任一项所述的方法在卵母细胞的体外保存/培养或者在卵母细胞体外成熟的控制和优化中的应用；

优选地，所述卵母细胞选自哺乳动物中猪、小鼠、大鼠、兔的卵母细胞，优选为猪卵母细胞，更优选为生发泡期的猪卵母细胞。

7.卵泡液在体外保存/培养卵母细胞中作为保存液或培养液，以抑制卵母细胞生发泡破裂中的应用；优选地，所述卵泡液选自猪或牛的卵泡液；更优选地，所述卵泡液选自猪的卵泡液。

8.如权利要求7所述的应用，其中，所述猪卵泡液的制备方法包括以下步骤：1)抽取猪卵泡液，自然沉降，取上清；2)离心，取上清；3)过滤除菌；

优选地，在制备保存卵泡液时，在步骤2)之后和步骤3)之前还包括将获得的上清液进行冻融、再次离心取上清；上清液优选在0℃～-20℃冻融，进一步优选在-20℃冻融；优选地，进行冻融、再次离心取上清液的步骤可以根据实际情况重复，并将重复获得的上清液过滤除菌；

更优选地，所述猪卵泡液通过以下方法制备：1)选取直径为2-6mm的猪卵泡，抽取卵泡液，自然沉降15min，取上清；2)15000转/分钟离心15min，取上清，-20℃冻融后再15000转/分钟离心15min，再反复冻融离心两次，每次取上清，弃沉淀；3)收集上清，过滤除菌。

9.一种用于保存/培养卵母细胞的制剂，所述制剂包含猪或牛的卵泡液；优选为猪的卵泡液；

优选地，所述猪卵泡液采用权利要求8所述的方法制备。

10.如权利要求9所述的制剂在保存卵母细胞中的应用；

优选地，所述卵母细胞选自猪、小鼠、大鼠、兔的卵母细胞，更优选为猪卵母细胞，进一步优选为发泡期的猪卵母细胞。