[发明专利]靶向PITPNM2抗登革热病毒寡核苷酸的结构和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程药物领域，具体地说是一种靶向PITPNM2(PITPNM2，phosphatidylinositol transfer protein，membrane-associated 2)治疗登革热病毒(DV，Dengue Virus)感染的反义寡核苷酸(ASODN，antisense oligodexynucleotide)的序列、结构及其治疗药物。

背景技术

登革热是世界上分布最广，发病率最高，危害最大的虫媒病毒传染病之一。近年来，随着全球气候的变暖和国际旅游交往的增加，DF的流行范围逐渐扩大(目前已存在100多个国家和地区有DF的流行)，同时发病率和死亡率也呈逐年上升的趋势。每年全球约发生1亿例DF，50万例DHF，其中25000人死亡。我国自1978年在广东，海南，福建，台湾等省份也多次发生DF的暴发流行。DF已给全球人类的生命安全带来极大的威胁。登革疫苗研究已有40多年的历史，但由于登革病毒有4个血清型，当人感染了一个血清型后，再感染其它血清型容易引起DHF和DSS，至今对其发病机理尚不清楚，因此疫苗的研究难度很大，目前仍无可用于人体的疫苗及有效的治疗药物。由于登革热病毒主要通过蚊子传播致病，同时病毒耐气溶胶化，能形成高度稳定且感染力强的气溶胶，常被用为失能性的生物战剂。因此，采用现代的分子生物学技术加强DF的疫苗及抗病毒的研究不仅具有社会意义，也具有重要的军事意义。

核酸药物是一类全新的基因靶向创新药物，长期以来一直是国际研究的热点，特别是近几年小核酸的发现进一步将核酸药物的研究推向一个前所未有的发展高潮。目前几乎所有大的国际制药公司均投入巨资进行核酸药物的研发，如诺华和辉瑞公司分别与ISIS和Eyetech公司共同开发的核酸药物Vitravene和Macugen已批准上市，另有几十个正在进行临床研究。

反义寡核苷酸是一类经过人工合成的寡核苷酸片段，长度多为15～30个核苷酸。通过碱基互补的原理，干扰相关基因的转录和翻译，或者整个基因组的复制，其优点在于其理论上的高度靶特异性，是一种理想的具有精确选择性的基因靶向治疗药物。由于反义寡核苷酸作用的高度特异性，因此被认为是极具潜力的抗肿瘤和抗病毒新药。国外已有一些著名制药企业已将反义药物作为其新药研究开发的重点方向之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗登革热病毒药物设计的宿主靶标PITPNM2，以及一种靶向PITPNM2阻断登革热病毒复制、抑制登革热病毒致病的寡核苷酸序列、结构及其药物。

本发明的主要内容是利用软件筛选与登革热病毒相互作用蛋白，根据已公开的蛋白mRNA序列，对其进行RNA二级结构的计算机模拟，靶向每个基因设计了5条反义寡核苷酸，总共针对17个基因设计了85条反义核酸，初步筛选结果显示DERL2-2抑制病毒所致细胞病变作用最佳，平均抑制率为67.65％，HSPA8-1和PITPNM2-3次之，平均抑制率为63.46％和63.27％，三个序列剂量依赖抑制登革热病毒引起的细胞病变PITPNM2-3效果最好，IC₅₀为2.03μM。

表1反义寡核苷酸的分子设计

总之，根据本发明，与PITPNM2基因的mRNA互补结合的寡核苷酸均能有效的抑制登革热病毒和保护细胞使其免于登革热病毒所致细胞病变，是一种特异性高、毒副作用小的新型抗登革热病毒的潜在药物。

根据本发明，针对PITPNM2mRNA的反义寡核苷酸能特异性抑制登革热病毒的致细胞病变和复制，有可能成为治疗及预防登革热相关疾病的新型生物工程药物。

根据本发明，反义寡核苷酸的长度与其细胞通透性，与靶序列结合亲和性及作用特异性等因素相关，PITPNM2的长度根据实验确定，本发明包含了与PITPNM2-3具有60％及其以上连续相同序列的任何长度寡核苷酸。

根据本发明，为增强反义寡核苷酸的核酸酶抗性、生物利用度及组织靶向性等，本发明包含了PITPNM2-3硫代修饰、甲基修饰或金刚乙胺修饰。

根据本发明，本发明的寡核苷酸及其修饰物可按本领域已知方法配成非肠道给药的制剂。

根据本发明，本发明的寡核苷酸及其修饰物治疗组成可应用单独的有效成分或组合物形式包括联合其他反义寡核苷酸及其衍生物形式，还可以含有治疗上可以接受的载体材料，如脂质体、融合肽或病毒载体等。