[发明专利]免疫层析法检测试剂及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种医疗检测产品及其制作方法，尤其涉及一种免疫层析法检测试剂及其制作方法。

背景技术

免疫层析法是二十世纪九十年代兴起的一种基于免疫胶体颗粒技术的快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体颗粒可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种人群的检查。因此该技术自发明以来得到了快速的发展，现在已应用在多个检测领域。基于该技术的产品已被包括广大基层医疗机构和家庭个人用户接受并使用。现有技术中的免疫层析法检测原理如图1所示，图2为层析流程图。该技术与以往常规诊断方法相比具有以下突出优点：

1).快速：全部检测过程仅需3-20分钟；

2).简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行；

3).可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可立刻拿到结果，不必等待；

4).稳定性好：试剂稳定，可长期保存。

但是随着使用者范围的进一步扩大，未经过专门培训的用户特别是个人用户在使用该产品时也暴露出了一定的问题。目前通常用来作为显色剂的胶体颗粒为胶体金，胶体金只能显示一种颜色-红色。因此基于胶体金的免疫层析试剂显示的质控线和测试线均为红色。但对一些用户而言，他们并不能正确辨别哪条是质控线，哪条是测试线，特别是在一根试纸条上不同位置上有多条红线分别代表不同分析物时，用户不能正确判断红线所对应的分析物，容易导致误判。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种能同时清楚和准确地通过不同颜色显示检测区和质控区，并且也能够通过不同的颜色显示不同的检测区的免疫层析法检测试剂及其制作方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种免疫层析法试剂的制作方法，包括以下步骤：

1).用至少两种颜色的直径为200-500nm的聚苯乙烯胶体颗粒作为彩色乳胶颗粒分别标记至少两种抗体：a，用0.01M PH7.4的PBS把彩色乳胶颗粒稀释成1％的终浓度(质量百分比)，再加入抗体或抗原使其终浓度为0.1mg/ml；b，将上述溶液置于4℃反应并且过夜；c，向步骤b所获得的溶液中加入终浓度为1％的BSA并封闭1小时；d，将步骤c中的溶液进行离心，得到乳胶抗体结合物的沉淀物；e，将步骤d中的沉淀物用含0.1％BSA的0.01M PH7.4的PBS复溶，复溶后的浓度为1％(质量百分比)，并置于4℃以备用；

2).点膜：用0.01M PH7.4的PBS分别将一种抗原和至少一种抗体稀释，所述抗原是特异性针对步骤1)中所述至少两种抗体中的一个抗体的抗原，步骤1)中剩下的抗体与步骤2)中所述至少一种抗体相同；稀释后的浓度为至0.5-3.0mg/ml，用点膜机将每种抗体以及抗原的稀释液分别点在硝酸纤维素膜上的不同区域，然后将硝酸纤维素膜置于37℃的温度下烘干2小时，密封好并置于室温备用；

3).点乳胶：用含0.1％BSA的0.01M PH7.4的PBS将步骤1)步中标记好的乳胶抗体结合物稀释，稀释后的浓度为0.2％-0.6％(质量百分比)，用点乳胶机喷点在聚酯膜上，然后将聚酯膜置于37℃的温度下烘干2小时，密封好并置于室温备用；

4).组装：将玻璃纤维、点好的聚酯膜、点好的硝酸纤维素膜和吸水滤纸分别按顺序粘贴在PVC片材上。

按照上述方法将玻璃纤维、点好的聚酯膜、点好的硝酸纤维素膜和吸水滤纸分别按顺序粘贴在PVC片材上后，再切成相应宽度装入塑料卡中待用。使用时，将待测标本加到玻璃纤维上，待测标本在毛细作用下向吸水滤纸端层析，在层析过程中，待测标本先将聚酯膜上的乳胶抗体结合物复溶，复溶后的混合物继续层析到硝酸纤维素膜上，与硝酸纤维素膜上包被的抗体和抗原发生免疫反应，显现出相应的带颜色的线条。

作为本所发明进一步改进的技术方案，在步骤1)中，用两种、三种或者四种不同颜色的乳胶颗粒标记两种、三种或者四种抗体，每一种颜色的乳胶颗粒标记一种抗体；在步骤2)中，用0.01M PH7.4的PBS分别将一种、两种或者三种抗体和一种抗原稀释。采用不同颜色的乳胶标记不同的抗体，测试时，各种不同的抗体以及抗原所在的区域能够显示不同的颜色。