[发明专利]一种测定酶活性的聚合物液膜电位传感器及其检测方法

权利要求书

1.一种测定酶活性的聚合物液膜电位传感器，包括工作电极(1)、外参比电极(2)、内参比电极(3)和电位测定仪(4)，其特征在于：电位测定仪(4)通过导线分别连接内参比电极(3)和外参比电极(2)，内参比电极(3)插入盛有内充液(8)的工作电极(1)内，工作电极(1)和外参比电极(2)插入盛有检测液(6)的检测池(5)中，工作电极(1)为固定有聚合物敏感膜(7)的电极载体，检测池(5)中设有具有扰动溶液作用的动力装置(9)。

2.按权利要求1所述的测定酶活性的聚合物液膜电位传感器，其特征在于：所述敏感膜为将聚合物基体材料、增塑剂和离子交换剂，按质量百分比20-80∶20-80∶0.1-10混合后溶入到四氢呋喃中，搅均后在室温下放置6-48h，待四氢呋喃挥发完全后即得到聚合物敏感膜。

3.按权利要求1所述的测定酶活性的聚合物液膜电位传感器，其特征在于：所述聚合物基体材料为聚氯乙烯、聚丁基丙烯酸酯、聚丙烯酸丁酯、聚醚酰亚胺、橡胶或溶胶凝胶膜；增塑剂为邻-硝基苯辛醚、二-2-乙基己基癸酯、癸二酸二丁酯或癸二酸二辛酯；离子交换剂为三-十二烷基甲基氯化铵、三-十四烷基甲基氯化铵、二壬基萘磺酸、二壬基萘磺酸盐或硼酸盐。

4.按权利要求1所述的测定酶活性的聚合物液膜电位传感器，其特征在于：所述动力装置为磁性搅拌子、旋转圆盘电极、注射泵或喷壁式电极。

5.一种按权利要求1所述测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：将通过电位测定仪连接的工作电极和外参比电极插入含有待测酶的检测液中，检测液中加入引发酶促反应的底物后，测定电位测定仪上引发酶促反应前后聚合物敏感膜上的电位变化，根据电位变化信号通过标准工作曲线测得酶活性浓度。

6.一种按权利要求1所述测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：待测酶液中加入底物引发酶促反应进行5s-4h后，终止酶促反应，将酶促反应液加入到检测液中，通过连接的工作电极和外参比电极的电位测定仪测定引发酶促反应前后聚合物敏感膜上的电位变化，根据电位变化信号通过标准工作曲线测得酶活性浓度。

7.按权利要求5或6所述的测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：所述待测酶液中加入底物甲，待电位稳定后加入引发酶促反应的底物乙，并测定电位测定仪上引发酶促反应前后聚合物敏感膜上的电位变化，根据电位变化信号通过标准工作曲线测得酶活性浓度。

8.按权利要求5、6或7所述测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：所述待测酶液可为氧化还原酶、转移酶、水解酶、具有相似催化性能的模拟酶或无机催化剂。

9.按权利要求5、6或7所述测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：所述氧化还原酶为辣根过氧化物酶、大豆过氧化物酶、漆酶、胆红素氧化酶、多酚氧化酶、酪氨酸酶；所述转移酶为糖苷酶；所述水解酶为蛋白酶或糖苷酶；所述具有相似催化性能的模拟酶为聚乙二醇-血红素；所述无机催化剂为四氧化三铁纳米颗粒或富勒烯。

10.按权利要求5、6或7所述测定酶活性的聚合物液膜电位传感器的检测方法，其特征在于：所述氧化还原酶、其模拟酶或无机催化剂的检测，所述底物甲可为苯胺、联苯胺、四甲基联苯胺、邻联茴香胺、二氨基联苯胺、对茴香胺、间茴香胺、邻茴香胺、甲苯胺、氯苯胺、氟苯胺、二甲基联苯胺、4，4’-亚甲基双邻氯苯胺、对氨基偶氮苯、萘胺、硝基萘胺、对乙氧基苯胺、邻苯二胺、间苯二胺、对苯二胺、N-苯基对苯二胺、联大茴香胺、邻联甲苯胺、三甲基苯胺、氨基苯甲酸、氨基比林、氨基安替吡啉、氨基芴，苯酚、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚、对苯氧基苯酚、对羟基联苯、甲氧基苯酚、甲基苯酚、氯苯酚、二甲基苯酚、二氯苯酚、对羟基苯甲酸、氯萘酚、抗坏血酸、多巴胺、对叔丁基儿茶酚、对乙酰氨基酚、酪氨酸、咖啡酸、儿茶酚、儿茶酚紫、铬黑T、酸性铬蓝K、偶氮染料、隐性亮绿、溴邻苯三酚；所述底物乙可为过氧化氢、过氧化甲基、过氧化乙基或氧气；所述转移酶或水解酶的检测，底物可为二糖衍生物、松柏醇或氨基酸衍生物。