[发明专利]辅助鉴定乳杆菌属菌株的专用引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定乳杆菌属菌株的专用引物及其应用。

背景技术

无论是在临床医学还是畜禽水产疾病防治，病原菌侵染肠道都被认为是疾病引发 途径之一。随着人们健康意识的提高和致病菌抗药性的增强，生物疗法逐渐取代了传 统的化学疗法(如施加抗生素)。服用益生菌-例如乳酸杆菌和双歧杆菌，会有效抑制 肠道中病原菌的生长，并且有益于肠道微生态环境。然而要起到益生作用，确定益生 菌能紧密地粘附在肠道粘膜上皮细胞是必要前提。有实验将直肠粘膜组织切片，进行 活菌培养和RAPD鉴定(Klarin，B.，Johansson，M.，Molin，G.，Larsson，A.， Jeppsson，B.，2005.Adhesion of the probiotic bacterium Lactobacillus plantarum 299v onto the gut mucosa in critically ill patients：a randomised open trial.Critical Care.9，285-293.)。也有实验用扫描电镜技术来研究沙门氏 菌和土著菌群粘附粘膜上皮的情况(S Soerjadi，A.，Rufner，R.，Snoeyenbos，G.， Weinack，O.，1982.Adherence of salmonellae and native gut microflora to the gastrointestinal mucosa of chicks.Avian Diseases，576-584.)。但是这些技术 手段均存在消耗时间长、劳动强度大、鉴定结果受培养条件等因素的影响、不可避免 的偏好性和缺陷性等。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定乳杆菌属菌株的专用引物及其应用。

本发明保护引物对甲和引物对乙组成的专用引物；所述引物对甲由序列表的序列 13所示DNA(rpoBup-I)和序列表的序列14所示DNA(rpoBdown-I)组成；所述引物 对乙由序列表的序列15所示DNA(rpoBup-II)和序列表的序列16所示DNA (rpoBdown-II)组成。

所述专用引物可用于辅助鉴定乳杆菌属菌株和/或乳杆菌属菌种。

所述专用引物可用于制备辅助鉴定乳杆菌属菌株的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定乳杆菌属菌株的试剂盒，包括所述专用引物。

本发明提供的辅助鉴定乳杆菌属菌株的方法，包括如下步骤：用所述专用引物对 待测菌株的总DNA进行PCR扩增；如果用引物对甲或引物对乙可以扩增出PCR产物， 待测菌株为候选的乳杆菌属菌株；如果用引物对甲和引物对乙都不能扩增出PCR产物， 待测菌株为候选的非乳杆菌属菌株。

所述PCR产物可为350-450bp的PCR产物，优选为379bp的PCR产物。

所述方法还可包括如下步骤(A)或步骤(B)：

(A)将PCR产物进行测序；根据测序结果辅助确定待测菌株为乳杆菌属的哪个菌 株；

(B)将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳，根据电泳图辅助确定待测菌株为乳杆菌 属的哪个菌株。