[发明专利]一种二氢杨梅素的纯化方法

说明书

技术领域

本方法涉及一种二氢杨梅素的纯化方法，具体地说涉及到以葡萄 科蛇葡萄属植物(如藤茶、粤蛇葡萄、大叶蛇葡萄、显齿蛇葡萄)的 提取物为原料，纯化二氢杨梅素的方法。属天然产物有效成分分离领 域。

背景技术

二氢杨梅素(3，5，7，3’，4’，5’-六羟基-2，3-双氢黄酮醇， Dihydromyricetin)是一种多羟基双氢黄酮醇。由于该化合物大量存 在于蛇葡萄科植物中，如显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、羽叶蛇葡萄、东北 蛇葡萄、光叶蛇葡萄等，特别是在显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中其含 量可达30％以上，故该化合物又称蛇葡萄素，见下图。

现代医学研究表明，二氢杨梅素除具有黄酮类化合物的普通特性 之外，在解除醇中毒、抗高血压、抑制体外血小板聚集和体内血栓的 形成、降低血脂和血糖水平，提高SOD活性以及保肝护肝等方面具有 特殊功效。

从蛇葡萄中提取二氢杨梅素的主要方法包括：有机溶剂提取、热 水提取、碱液提取和二氧化碳超临界萃取等。由于二氢杨梅素极性大 在二氧化碳中的溶解度较小，且在碱液中又不稳定，因此用碱液提取 或用二氧化碳超临界萃取的效率均较低。通常采用是水、乙醇，以及 两者的混合物为溶剂来浸提，混合溶剂提取效率较高，单次提取率可 达30％，粗产品中二氢杨梅素的含量一般在20～80％之间。

二氢杨梅素粗品纯化可用重结晶、大孔吸附树脂、高效液相色谱、 高效逆流液相色谱等方法。高效液相色谱法及高效逆流液相色谱法分 离效率高，但对设备要求高、且单次分离量小，难以实现规模化生产， 只适宜制备对照品。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634) 使用GS10A-AKTAprime plus高速逆流色谱联用设备，采用石油醚-乙 酸乙酯-甲醇-水-三氯乙酸五元溶剂系统，当进样体积为2～50ml(样 品量约为300mg～6g)、转速为700～800r/min、流速为1.5～2.5 ml/min时，5h内均可将粗二氢杨梅素粗样品(含量40.1％)分离得 99％白色结晶。

大孔吸附树脂自身具有多孔结构，可根据空隙大小对化学成分进 行机械筛分，同时又带有极性基团，可通过范德华力和形成氢键对极 性相近的化学成分进行选择性吸附，该方法方便，处理量大，能连续 生产。陈玉琼等(食品科学，2009，30(9)：51～55)选用了十余种大孔 树脂吸附分离二氢杨梅素粗品，用乙醇的梯度水溶液洗脱，结果产品 纯均达不到90％。张友胜等(天然产物研究与开发，2002，14(3)：50～ 54)也对大孔吸附树脂进行了筛选，选用大孔吸附树脂D-16(非极性， 粒径范围为0.3～1.25mm)，运用“增温溶解保温过柱，温水解吸”的 方法，可以将含量80％二氢杨梅素纯化至90％。由于大孔吸附树脂分 离二氢杨梅素存在吸附选择性不高，难以得到高纯产品；同时，过柱 时还要求保温，操作难度大；另外，树脂需再生及洗脱溶剂消耗较大 等问题，产业化有一定难度。

重结晶方法纯化二氢杨梅素，工艺相对简单，操作比较方便，适 应于中、小企业应用。重结晶主要采用乙醇、水作溶剂。以水为溶剂， 沸水溶解二氢杨梅素约为1g/100ml，单次重结晶处理量有限；且随 着水温降低，趁热过滤时二氢杨梅素析出过快，过滤操作损失大，回 收率低。高建华等(天然产物研究与开发，2006，18：81～84)用水 为溶剂，经反复6次或以上重结晶，二氢杨梅素的含量可从50％纯化 到95％。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634)用水对 二氢杨梅素粗品(40.1％)重结晶，未加活性炭脱色，需反复9次以上重 结晶，或加活性炭脱色，需6次以上重结晶，产品纯度才能达90％以 上，回收率大于75％。因此，用水作溶剂，存在单次处理量小；需反 复多次结晶，高能低效，且操作繁琐，不适宜产业化。

用乙醇作溶剂，热乙醇溶解二氢杨梅素的能力较强，但冷却过程 中二氢杨梅素析出慢，色素易保留在产品中至产品颜色偏黄；且二氢 杨梅素在冷乙醇的溶解度较大，需在0～4℃下陈化，来提高纯化回收 率。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634)用70～80℃ 乙醇对二氢杨梅素粗品(40.1％)重结晶，反复4次以上，产品纯度可达 95％，回收率约为71％。该方法溶剂消耗量大，需低温陈化，对设备要 求高。

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