[发明专利]合成编码文库的方法

权利要求书

1.一种合成包含与编码寡核苷酸可操作连接的功能部分的分子的方法，该方法包括以下步骤：

(a)提供由包含n个结构单元的起始功能部分组成的起始化合物，其中n是1或大于1的整数，其中该起始功能部分包含至少一个反应基团，并且与起始寡核苷酸可操作连接；

(b)将该起始化合物与包含至少一个互补反应基团的结构单元反应，其中该至少一个互补反应基团与步骤(a)的反应基团互补，反应条件适合所述互补反应基团反应形成共价键；

(c)将所述起始寡核苷酸与标识步骤(b)的结构单元的引入寡核苷酸反应，反应条件适合所述引入寡核苷酸与起始寡核苷酸连接形成编码寡核苷酸，并存在催化起始寡核苷酸与引入寡核苷酸连接的酶；

从而产生包含功能部分的分子，该功能部分含有n+1个结构单元，并且与编码寡核苷酸可操作连接。

2.权利要求1的方法，其中步骤(c)的功能部分包含反应基团，重复步骤(a)至(c)一次或多次，从而形成循环1至i，其中i是2或大于2的整数，其中循环s的步骤(c)的产物是循环s+1的起始化合物，其中s是i-1或更小的整数。

3.权利要求1的方法，其中步骤(c)在步骤(b)之前，或者步骤(b)在步骤(c)之前。

4.权利要求1的方法，其中所述结构单元的至少一个是氨基酸或活化的氨基酸。

5.权利要求1的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自氨基、羧基、磺酰基、膦酰基、环氧基、吖丙啶基和异氰酸酯基。

6.权利要求1的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自羟基、羧基、磺酰基、膦酰基、环氧基、吖丙啶基和异氰酸酯基。

7.权利要求1的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自氨基和醛基或酮基。

8.权利要求7的方法，其中所述反应基团与互补反应基团之间的反应在还原条件下进行。

9.权利要求1的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自磷叶立德基和醛基或酮基。

10.权利要求1的方法，其中所述反应基团和互补反应基团通过环加成作用反应，形成环结构。

11.权利要求10的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自炔和叠氮基。

12.权利要求10的方法，其中所述反应基团和互补反应基团选自卤代杂芳基和亲核基团。

13.权利要求12的方法，其中所述卤代杂芳基选自氯代嘧啶、氯代三嗪和氯代嘌呤。

14.权利要求12的方法，其中所述亲核基团是氨基。

15.权利要求1的方法，其中所述酶选自DNA连接酶、RNA连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和拓扑异构酶。

16.权利要求1的方法，其中所述起始寡核苷酸是双链或单链的。

17.权利要求16的方法，其中所述起始寡核苷酸包含PCR引物序列。

18.权利要求16的方法，其中所述起始寡核苷酸是单链的，且引入寡核苷酸是单链的；或者起始寡核苷酸是双链的，且引入寡核苷酸是双链的。

19.权利要求18的方法，其中起始功能部分和起始寡核苷酸通过连接部分连接。

20.权利要求19的方法，其中所述起始寡核苷酸是双链的，所述连接部分与起始功能部分和与起始寡核苷酸的两条链共价偶联。

21.权利要求1的方法，其中所述引入寡核苷酸为3到10个核苷酸的长度。

22.权利要求2的方法，其中循环i的引入寡核苷酸包含PCR封闭引物。

23.权利要求2的方法，其在循环i中进一步包括以下步骤：

(d)将包含封闭PCR引物序列的寡核苷酸与编码寡核苷酸连接。

24.权利要求23的方法，其中在催化所述连接的酶的存在下，将包含封闭PCR引物序列的寡核苷酸与编码寡核苷酸连接。

25.权利要求2的方法，其在循环i后进一步包括以下步骤：

(e)环化所述功能部分。