[发明专利]一种视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种为实验医学中用于手术治疗视网膜静脉阻塞性疾病的研究的活体动物眼模型制作方法，具体是视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型的制作方法。

背景技术

视网膜分支静脉阻塞(Branch Retinal Vein Occlusion，BRVO)是继糖尿病性视网膜病变后第二种常见的引起视力损害的视网膜血管性疾病，严重者可导致失明，一直是眼底病领域的研究重点。一般认为，该病是由于视网膜静脉内血栓形成引起视网膜静脉回流所致，但具体原因和病理机制尚不完全清楚。目前临床上常用的视网膜激光光凝和玻璃体切除手术治疗仅着眼于分支静脉阻塞后的缺血缺氧并发症，非对因治疗。而近年中出现的一些新治疗方法如激光血管脉络膜吻合术、静脉穿刺溶栓术等其实际疗效仍有待进一步证实。

视网膜中央血管系统与心脏冠状血管系统有相似之处，缺乏吻合支，一旦阻塞后循环障碍很难改善。临床上可通过冠脉血管搭桥手术治疗心肌缺血，那么理论上也可通过视网膜静脉人工血管旁路术来治疗视网膜分支静脉阻塞。人工血管旁路术在临床上已应用多年，主要治疗肢体大血管阻塞和心脏血管阻塞、畸形。由于视网膜纤细的血管管径(视网膜动脉管径小于0.1mm，视网膜静脉管径小于0.2mm)，人工血管的材料和眼球内狭小的操作空间(约直径25mm的球形空间)等原因，极大地限制了眼内视网膜血管超显微手术的研究和发展。

发明内容

本发明的目的在于为用于研究视网膜静脉人工血管旁路术治疗视网膜分支静脉阻塞的时机、效果、安全性及用于研究视网膜血管缺血再灌注损伤的机制和转归而提供一种视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型的制作方法。

为实现上述目的，本发明公开了一种视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型的制作方法，其特征在于包括以下步骤：

1)选取眼球直径约20mm-28mm的哺乳动物作为实验动物；

2)通过人工方法阻断视网膜主干静脉第一分支处血管以造成视网膜分支静脉阻塞；

3)进行常规的眼科经巩膜三通道玻璃体切除术；

4)分别在阻塞处远离视盘端的一条分支静脉上和靠近视乳头端的主干静脉上各设定一点作为血管旁路的起点和止点，所述起点和止点之间的距离为5mm-7mm；

5)制作人工血管：采用内径为50um-60um，管壁厚度为5um-10um的高分子材料的纤细导管，依据主干和分支静脉的成角设定弧度，以大于起点和止点两点间距离3mm设定为长度，两端剪成锐利斜面后置于肝素钠液体浸泡；

6)将人工血管经巩膜通道切口导入眼内，将人工血管的锐利的两端穿刺起点和止点的血管壁，插入血管内达1.5mm长度，然后电凝穿刺处血管促进血管收缩致穿刺口闭合

7)缝合手术切口，完成视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型制作。

通过本发明的方法可以建立一种视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型，用于研究视网膜静脉人工血管旁路术治疗视网膜分支静脉阻塞的时机及效果；用于研究视网膜静脉人工血管旁路术的安全性；用于研究视网膜血管缺血再灌注损伤的机制和转归；为开展视网膜分支静脉阻塞的一种新的临床手术方法奠定了研究基础。

下面将结合附图与具体实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

图1是动物眼视网膜分支静脉阻塞后的视网膜静脉血管分布局部解剖示意图；

图2是动物眼视网膜静脉人工血管旁路术示意图。

图中所示：1视网膜分支静脉阻塞点位置；2血管旁路的起点位置(视网膜分支静脉上)；3血管旁路的止点位置(视网膜主干静脉上)；4人工血管。

具体实施方式

本发明中视网膜静脉人工血管旁路术的活体动物眼模型的实验动物可以是选自猪、犬、羊、猴等哺乳动物，下面以实验用小型猪为例介绍本发明活体动物眼模型的具体制作方法：

首先选2个月月龄的实验用小型猪，术前连续五天给予抗凝血药物拜阿司匹林肠溶缓释片300mg/每日，华法林钠片500mg/每日。在术前5-7天，以1ml注射器前房穿刺抽取0.1ml房水，于颞上象限角膜缘后2.5mm，通过30G针头向玻璃体腔内注入0.5U/0.05ml纤溶酶和50U/0.05ml透明质酸酶，诱导完全的玻璃体后脱离，便于术中完全的切除玻璃体。接着预先用光动力学方法造成视网膜分支静脉阻塞，具体是将孟加拉玫红(Rose Bengal)(美国Sigma公司产品)用生理盐水配制成20g/L，经0.22um滤过膜过滤，4℃避光保存。于鼻上方睫状扁平部做巩膜穿刺，插入玻璃体切割机眼内照明的光导纤维(输出功率10mW)。耳缘静脉推注盂加拉玫红液(20mg/kg)。1min后用光导纤维直接照射视网膜主干静脉第一分支处血管，避开伴行动脉.照射10-15分钟，直到静脉局部白色血栓逐渐形成构成视网膜分支静脉阻塞点1，血流被阻断，静脉远端纡曲，如图1所示。然后进行玻璃体切除术：首先对动物进行麻醉：手术前禁食24小时，禁饮2小时，麻醉前30min肌注阿托品0.5mg，肌注速眠新II 0.3ml/kg成功进行麻醉诱导后，腹腔内注射3ml/kg 10％水合氯醛麻醉剂进行全身麻醉，随后在高放大率、双手操作系统眼科手术显微镜下进行常规的眼科经巩膜三通道玻璃体切除术。再分别在阻塞点1处远离视盘端的一条分支静脉上各设定一点作为血管旁路的起点2，在靠近视乳头端的主干静脉上设定一点作为血管旁路的止点3，起点2和止点3之间的距离为6mm。下一步是人工血管的准备：选用聚酰亚胺材料的微导管(内径为50.8um，管壁为7.6um，美国HV Technologies公司产品)作为人工血管，依据主干和分支静脉的成角设定弧度，以大于起点2和止点3两点间距离3mm设定为长度，两端剪成锐利斜面后至于肝素钠液体浸泡有利于抗凝血，再将人工血管经巩膜通道切口导入眼内，用眼科25-gauge视网膜镊夹持，先将人工血管的锐利的一端穿刺起点2点的血管壁，插入血管内达1.5mm长度，再将人工血管的另一段穿刺止点3点的血管壁，插入血管内达1.5mm长度，血管壁的自然收缩使穿刺口闭合，如图2所示，若仍存在少量出血可以电凝穿刺处血管促进血管收缩致穿刺口闭合，缝合手术切口。为了检验模型的效果，接着采用术中即时眼底血管荧光造影技术，即在耳缘静脉内快速推注10％荧光素钠(15～30mg/kg)，马上开始在蓝色光波激发下用荧光眼底摄像机摄像，证实人工血管旁路通畅和穿刺口无渗漏，即证实动物眼模型制作成功。