[发明专利]一种植物组织培养中污染防止方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养领域，尤其涉及用植物组织培养中防止污染的方法。

背景技术

植物组织培养中的污染问题一直是组织培养中一个重要的影响因素。高污染率让组织培养的成本居高不下，特别在大规模工厂化生产植物组培苗的时候，防止污染问题显得尤为重要。这就需要改进现有的方法，减少植物组织培养过程中的污染率，提高生产效率，降低成本。

发明内容

本发明提供一种方法，在植物组织培养的基质中，又称培养基，添加一些药剂来防止培养过程中受真菌或细菌的污染。本发明的小组成员发现在植物组织培养中，受假单胞菌属(Pseudomonas spp.)和芽孢杆菌属(Bacillus spp.)等细菌污染的频率较高；青霉和曲霉等真菌污染的频率也较高。根据这一发现，本发明的小组成员经过大量的实验来筛选出防止这几种细菌或真菌造成的污染有效的药剂。

本发明提供一种植物组织培养中防止细菌或真菌污染的方法，包括如下步骤：(1)准备植物组培养所需要的培养基；(2)在培养基中加入下列药剂中的一种或几种：80％乙蒜素、90％链·土霉素、0.5％氨基寡糖素水剂、10％ClO₂、过氧乙酸、次氯酸钠或三氯异氰尿酸。

在一些优选的方式中，在步骤(2)中加入的药剂为乙蒜素、链·土霉素、氨基寡糖素或三氯异氰尿酸中的一种或几种。

在另一些优选的方式中，在步骤(2)中，把所述的药剂稀释1000-6000倍后再加入到步骤(1)中准备的培养基中。稀释的倍数可以是100倍，至少为500倍、至少为1000倍、或至少为2000倍、至少为2500倍、至少为3000倍、至少为4000倍、至少为5000倍或至少为6000倍。在一个更优选的方式中，当步骤(2)中所述的药剂为乙蒜素、氨基寡糖素或三氯异氰尿酸的时候；所述药剂的稀释倍数为2000倍。

在另一些实施方式中，该方法还包括：在步骤(2)之后对培养基进行高温消毒灭菌。

另一方面，本发明提供植物组织培养中防止细菌或真菌污染的方法，顺次包括如下步骤：(1)准备植物组培养所需要的培养基；(2)在培养基中加入下列药剂中的一种或几种：80％乙蒜素、90％链·土霉素、0.5％氨基寡糖素水剂、10％ClO₂、过氧乙酸、次氯酸钠或三氯异氰尿酸；(3)高温消毒。在一个优选的方式中，药剂为80％乙蒜素。在一个更优选的方式中，80％乙蒜素的稀释倍数为100-6000倍，优选的为1500-6000倍，可以是2000、3000、3500、4000、4500、5000或6000倍。

另一方面，本发明提供一种植物组织培养中防止细菌或真菌污染的方法，顺次包括如下步骤：(1)准备植物组培养所需要的培养基；(2)高温消毒；(3)在培养基中加入下列药剂中的一种或几种：80％乙蒜素、90％链·土霉素、0.5％氨基寡糖素水剂、10％ClO₂、过氧乙酸、次氯酸钠或三氯异氰尿酸。在一个优选的方式中，药剂为链·土霉素。在一个更优选的方式中，链·土霉素的稀释倍数为100-6000倍，优选的为1500-6000倍，可以是2000、3000、3500、4000、4500、5000或6000倍。

在以上所有的方法中，所述的细菌为假单胞菌属或芽孢杆菌属。或真菌为青霉或曲霉。

在以上所有的方法中，所述的真菌为青霉或曲霉的时候，所加的药剂为乙蒜素、链。土霉素、氨基寡糖素或三氯异氰尿酸的一种或几种。更优选的，当真菌为青霉，使用药剂乙蒜素、链·土霉素或氨基寡糖素，并且他们的稀释倍数为1000倍。

在以上所有的方法中，向培养基中加入药剂的时间或方式可以是以下几种中的一种或几种结合使用：(1)培养基的准备：通常在蒸馏水中添加一定量的某些营养物质成分来配置植物组织培养所使用的培养基；可以先用蒸馏水来稀释药剂到如上所描述的倍数，然后再在这些稀释好的溶液中添加植物组织培养中所需要的营养元素或其他试剂，最后进行高温灭菌或通过其它方法灭菌；或者，(2)先把配置好的培养基进行高温灭菌，待在分装冷却的培养基的时候把用无菌水稀释好的药剂加入到培养基上；或者，(3)等把培养基到入玻璃培养皿中，然后再把一定体积的稀释好的药剂溶液加入到培养瓶中，然后再在培养瓶中定植外植体或组培过的幼苗；或者(4)还可以在植物组织培养任意过程中直接向培养基上加入一定体积的药剂或者经过倍数稀释的药剂溶液来防止污染，例如在获得无菌苗、愈伤组织、分化培养、继代培养或生根培养过程中添加药剂。