[发明专利]一种人甲状旁腺激素(1-34)的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的纯化方法，尤其涉及人甲状旁腺激素(1-34)的 纯化方法。

背景技术

人甲状旁腺激素(1-34)，也称为pTH(1-34)，是人甲状旁腺激素 (Parathyroid Hormone，human)氨基端的1-34个氨基酸组成的多肽。 重组人甲状旁腺激素(1-34)[rh pTH(1-34)]又称特立帕肽 (teriparatide)，由美国Eli Lilly公司研发，属于基因重组药物，2002 年被美国FDA批准上市。它是第1个被批准用于治疗严重骨质疏松症的骨 形成促进剂，有较广泛的市场应用前景。

发明内容

本发明提出了一种纯化pTH(1-34)的方法，纯度高且收率好，达到产 业化要求。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案包括以下步骤：

步骤1)：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为 0.05％-0.2％的三氟乙酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度：B％：20％～ 40％，将粗肽溶液进行梯度洗脱；

所述“粗肽”是指采用液相合成法或固相合成法得到的，尚未经过精 制处理的人甲状旁腺激素(1-34)粗肽或者纯度不能满足药用的人甲状旁腺 激素(1-34)。“粗肽溶液”是指粗肽溶于乙腈水溶液所得到的溶液，所使 用的水为纯净水，并符合注射用水标准，优选超纯水，具体的配置过程详 见样品处理。本发明的“乙腈”的纯度级别优选色谱纯。A相和B相的比 例大于20∶80，小于95∶5，A相和B相在上述比例内可以达到对粗肽 进行快速分离的目的。

步骤1)下文也表述为“纯化”。

步骤2)采用反相高效液相色谱法将人甲状旁腺激素(1-34)的三氟乙 酸盐转成醋酸盐。步骤2)下文也表述为“转盐”。

所述“反相高效液相色谱”的固定相为八烷基硅烷键合硅胶，转盐的 方法优选为：用含3％--8％乙腈的醋酸溶液冲洗15-30min，然后用乙腈洗 脱，收集人甲状旁腺激素(1-34)溶液；醋酸溶液的浓度为0.05％--0.2％， 优选为0.1％。洗脱步骤所采用的乙腈浓度为30-60％，优选50％。

本发明提供的纯化pTH(1-34)方法操作简单可行、纯度高、收率 高，达到产业化要求。采用本发明的纯化方法产品纯度可达到98％以上， 收率25％。

纯化规模包括以下规格色谱柱(柱子直径×长度)：5cm×25 cm、15cm×25cm、30cm×25cm。

具体实施方式

实施例一：

1.样品处理：将粗肽加入到超纯水，加入20％乙腈，超声使样品完 全溶解后用滤膜过滤，收集滤液备用。

2.纯化：

纯化条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱 子直径和长度为：5cm×25cm。流动相：A相：0.05％三氟乙酸水 溶液；B相：乙腈，流速：50-80ml/min，梯度：B％：20％～40％，检测波 长：280nm。进样量为1.5-3g。

纯化过程：将色谱柱用50％以上的乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量 为1.5-3g。线性梯度洗脱60min，收集目的峰，将收集的人甲状旁腺激素 (1-34)溶液于水温不超过35℃的条件下减压旋蒸浓缩至约10-20mg/mL 后备用。

3.转盐：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子 直径和长度为：5cm×25cm。将色谱柱用50％以上的乙腈醋酸溶液 冲洗干净后上样，上样量1.5-3g，用含3％乙腈的0.05％的醋酸溶液冲洗 15-30min，然后用50％乙腈洗脱，收集目的峰，将收集的人甲状旁腺激素 (1-34)溶液于水温不超过35℃条件下减压旋蒸浓缩至约150-200mg/mL 后转至合适大小西林瓶。冷冻干燥后即可得到纯度大于98％的pTH(1- 34)。

实施例二：

1.样品处理：将粗肽加入到超纯水，加入20％乙腈，超声使样品完 全溶解后用滤膜过滤，收集滤液备用。

2.纯化：

纯化条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱 子直径和长度为：15cm×25cm。流动相：A相：0.1％三氟乙酸水 溶液；B相：乙腈，流速：400-450ml/min，梯度：B％：20％～40％，检测 波长：280nm。进样量为10-20g。