[发明专利]一种检测重组人白细胞介素-12蛋白活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测重组人白细胞介素-12蛋白活性的方法。

背景技术

人白细胞介素-12(Human Interleukin 12，hIL-12)是一种异二聚体细胞因子， 由p35和p40两个亚单位通过多对二硫键连接组成。hIL-12又称为NK细胞刺激因子 (NKSF)，hIL-12具有强烈的抗肿瘤和抗病毒效益，这种效应是由机体的自然杀伤细 胞(Natural killer cells，NK细胞)介导的，hIL-12还在细胞毒性T细胞、辅助性 T细胞、B细胞的发育分化和成熟活化中起重要作用，被誉为免疫系统行使抗病毒、抗 肿瘤的核心调控因子，机体天然免疫系统的关键蛋白质。这一系列的生物学功能使人 们认识到hIL-12有可能在临床应用中发挥重要作用。目前，重组人白细胞介素 -12(Recombinant Human Interleukin 12，rhIL-12)作为一种药物已经进入抗肿瘤、 抗病毒性疾病和过敏性哮喘的临床试验阶段。rhIL-12的活性直接关系到临床上治疗 效果评价及用药剂量等关键问题。目前，用于活性测定的NK细胞、T细胞主要来源于 正常人外周血或新生儿脐血，由于个体差异，实验稳定性、重复性、灵敏度均难以保 证。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性的方法。

本发明所提供的检测重组人白细胞介素-12蛋白的活性的方法，包括如下步骤：

1)用不同浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激人自然杀伤细胞NKG细胞 CGMCC No.2901产生γ干扰素，检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激 人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生的γ干扰素的量，以产生的γ干扰素的 量为纵坐标，以重组人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度为横坐标，作曲线图，得到S 型标准曲线图，从所述S型标准曲线图中得到所述γ干扰素的量为其最大值的一半时 所对应的重组人白细胞介素-12蛋白标准品的浓度值，将该浓度值记作ED_50s；

2)用不同浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人自然杀伤细胞NKG细胞 CGMCC No.2901产生γ干扰素，检测每种浓度的待测重组人白细胞介素-12蛋白刺激人 自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901产生的γ干扰素的量，以产生的γ干扰素的量 为纵坐标，以待测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度为横坐标，作曲线图，得到S型 曲线图，从所述S型曲线图中得到所述γ干扰素的量为其最大值的一半时所对应的待 测重组人白细胞介素-12蛋白的浓度值，将该浓度值记作ED_50r；

3)根据公式I，计算得到所述待测重组人白细胞介素-12蛋白的活性，

Pr=Ps×ED50sED50r]]>(公式I)

其中，Ps为重组人白细胞介素-12蛋白标准品的活性值，Pr为待测重组人白细胞 介素-12蛋白的活性值；

所述步骤1)中所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901与所述步骤2) 中所用的人自然杀伤细胞NKG细胞CGMCC No.2901的状态相同，所述步骤1)的刺激 NKG细胞产生γ干扰素的方法与所述步骤2)中的刺激NKG细胞产生γ干扰素的方法相 同，所述步骤1)的检测每种浓度的重组人白细胞介素-12蛋白标准品刺激NKG细胞产 生的γ干扰素的量的方法与所述步骤2)中的检测每种浓度的待测重组人白细胞介素 -12蛋白刺激NKG细胞产生的γ干扰素的量的方法相同；

所述步骤1)和所述步骤2)没有先后顺序。