[发明专利]组织特异表达启动子及其获得方法和应用

权利要求书

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6任一所示。

2.权利要求1所述的多核苷酸的用途，用于与启动子或启动子片段操作性连接，调控目的基因在植物组织特异性表达；

其中，所述的启动子片段具有该启动子的引发转录的必要位点及转录起始点。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的多核苷酸与启动子或启动子片段操作性连接，驱动目的基因在植物的胚乳中特异性表达，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4任一所示。

4.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的多核苷酸与启动子或启动子片段操作性连接，驱动目的基因在植物的胚中特异性表达，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

5.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的多核苷酸与启动子或启动子片段操作性连接，驱动目的基因在植物的种子中特异性表达，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

6.一种构建物，其特征在于，所述构建物依次具有如下元件(5’→3’)：(多核苷酸-X)_n，启动子或其片段；

其中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6任一所示；

其中，n为1-100的正整数；

其中，X为无，或长度在1-100bp的核酸；

其中，启动子的片段具有该启动子的引发转录的必要位点及转录起始点。

7.如权利要求6所述的构建物，其特征在于，所述的启动子或其片段含有TATA-盒结构。

8.如权利要求6或7所述的构建物，其特征在于，所述的启动子或启动子片段选自：烟草花叶病毒35S启动子，或烟草花叶病毒35S基本启动子。

9.如权利要求8所述的构建物，其特征在于，所述的烟草花叶病毒35S基本启动子具有SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列。

10.如权利要求6所述的构建物，其特征在于，所述的构建物的启动子或其片段下游还包括一目的基因。

11.如权利要求6所述的构建物，其特征在于，所述的构建物是表达载体。

12.一种植物细胞，其特征在于，所述的细胞中含有权利要求1所述的多核苷酸或权利要求6-11任一所述的构建物。

13.权利要求6-11任一所述的构建物的用途，用于调控目的基因在植物组织特异性表达。

14.如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述的构建物中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4任一所示，该构建物用于驱动目的基因在植物的胚乳中特异性表达。

15.如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述的构建物中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，该构建物用于驱动目的基因在植物的胚中特异性表达。

16.如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述的构建物中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，该构建物用于驱动目的基因在植物的种子中特异性表达。

17.一种调控目的基因在植物组织特异性表达的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供一构建物，所述构建物依次具有如下元件(5’→3’)：(多核苷酸-X)_n，启动子或其片段；其中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6任一所示；n为1-100的正整数；X为无，或长度在1-100bp的核酸；其中启动子的片段具有该启动子的引发转录的必要位点及转录起始点；

(2)将目的基因可操作性地插入到步骤(1)的构建物的下游；

(3)将步骤(2)插入目的基因的构建物转入到植物细胞或组织中；和

(4)将步骤(3)获得的转入了所述多核苷酸的植物细胞或组织再生成植物，从而目的基因在该植物的组织中特异性表达。