[发明专利]抗高迁移率族蛋白B1的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及抗高迁移率族蛋白B1的单克隆抗体。

背景技术

HMGB-1(high mobility group box，I)是染色体蛋白中高迁移率家族的成员之 一。HMGB-1是一条由219个氨基酸残基构成的、分子量为30kDa的单链多肽，其表 达普遍而且量也较大。蛋白可被分为三大部分：两个同源的DNA结合区域(Boxes A和 B)及酸性C末端。HMG boxes A和B是由相似的80个氨基酸片段形成的L型结构。

HMGB-1结合于双链DNA的小沟内，结合部位与DNA序列无关，但与其结构密切相 关，通常位于节状DNA、弯曲DNA或十字交叉点处。HMGB-1可以迅速地弯曲DNA，促 成核蛋白复合体的形成，进而促成DNA结合蛋白与其各自对应位点的相互作用。如p53 转录因子不能直接与直线DNA结合，只有在HMGB-1先与DNA结合并使其弯曲后，p53 才能有效地与其对应位点相结合，然后HMGB-1从复合体中脱离出来。HMGB1-/-鼠在 GR应答基因的激活上有缺陷，因此会因血糖过低而在出生后不久就死去，此结果进一 步支持了HMGB-1作为转录调控因子的结论。

HMGB-1存在于神经细胞的细胞间隙中，可以刺激神经突起的生长。HMGB1刺激平 滑肌细胞(SMC)和原纤维细胞的迁移，还能够引起细胞骨架肌动蛋白的重组以及运动型 细胞的形态改变。此外，HMGB-1与纤维蛋白酶原活化系统相关，因此在细胞外蛋白水 解、细胞迁移、炎症、纤维蛋白溶解、伤口愈合和肿瘤入侵的调控中发挥作用。

HMGB-1不具有信号序列，它的分泌过程不通过经典的″粗面内质网-高尔基体″途 径。在活化的单核细胞中，HMGB-1经过一个从核内到分泌小泡的再分配过程，然后经 细胞外分泌得以释放。

研究表明，用LPS刺激RAW264.7细胞，应用SDS-PAGE分析细胞培养液中成分变 化，18个小时后，发现有分子量为30-KD的蛋白出现。根据该因子的N端序列分析， 将其归属于HMG-1，一种DNA结合的非组蛋白。HMG-1后改名为HMGB-1。

小鼠实验证实，注射LPS、IL-1或TNF-8小时后，单核巨噬细胞开始分泌HMGB1， 并在随后的24h中血清HMGB1浓度维持较高水平，HMGB1抗体可以改善LPS引起的内 毒素血症；反过来，HMGB1也可刺激单核巨噬细胞分泌某些促炎因子，如TNF-、IL-1、 II-6、IL-8等。注射HMGB1小鼠出现内毒素休克样症状。人体检测也发现，脓毒症患 者血清HMGB1水平升高，并且升高的程度与感染严重性相关。

当细胞坏死或受损时，核内的HMGB1可释放到胞外，引发单核巨噬细胞分泌促炎 因子；而促炎因子又反过来促进HMGB1的分泌，这样正反馈环就形成了。在炎性反应 的后期，这种正反馈效应对炎性反应的维持起到了相当重要的作用。在近期研究中， 发现HMGB1的功能与全身炎症反应综合症，急性肺损伤，类风湿性关节炎，糖尿病以 及脏器缺血造成的梗塞密切相关。

因此，需要一种有效抑制HMGB1行使促炎症因子功能的物质，以治疗炎症相关疾 病。

发明内容

本发明的一个目的是提供分泌特异性结合人高迁移率族蛋白B1的单克隆抗体。

本发明所提供的抗体可以为如下1)、2)、3)或4)所述的抗体：

1)一种抗体，其重链可变区具有序列表中序列1所示的氨基酸残基序列，其轻链 可变区具有序列表中序列2所示的氨基酸残基序列。

2)一种抗体，其轻链具有序列表中序列3所示的氨基酸残基序列，重链具有序列 表中序列4所示的氨基酸残基序列。此抗体为人-鼠嵌合抗体.

3)一种抗体，其氨基酸残基序列如序列表中序列7所示。此抗体为单链抗体。

4)由杂交瘤细胞株抗人HMGB1杂交瘤3E8 CGMCC No.2906分泌得到的单克隆抗 体。

由杂交瘤细胞株抗人HMGB1杂交瘤3E8 CGMCC No.2906分泌得到的单克隆抗体 的Fab片段也属于本发明的保护范围。

上述1)中所述抗体的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因也属于本 发明的保护范围。

上述2)中所述抗体的重链和轻链的编码基因也属于本发明的保护范围。所述抗 体的轻链编码基因具体具有序列表中序列5的核苷酸序列，重链编码基因具体具有序 列表中序列6的核苷酸序列。