[发明专利]一种昆虫病原线虫的繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种线虫的繁殖方法，属于生物繁殖培养领域。

背景技术

昆虫病原线虫是一种专门寄生害虫的线虫，它具有寄主范围广、能主动寻找寄主、对人畜及环境安全无毒、并能人工大量培养等优点，能够有效防治农林、园艺植物的土栖和钻蛀性害虫，如桃小食心虫、各种蛴螬、天牛、地老虎等，因此被国内外专家称为高潜能生物防治武器。

昆虫病原线虫繁殖主要分为活体繁殖和离体人工培养基繁殖，其中离体人工培养基繁殖又分为固体培养和液体培养，两方法均需要多种原料和大型的仪器设备，投资高，操作步骤多，生产周期长。而活体繁殖方法简便、所用仪器设备很少、生产周期短，繁殖的线虫致病力高于离体人工培养基繁殖的线虫。目前活体繁殖主要采用大蜡螟和黄粉虫幼虫，由于多年来大蜡螟和黄粉虫人工饲养成本较高，制约了活体繁殖线虫的发展，随着黄粉虫人工饲养新技术的研究与推广，年产量不断上升，其成本大幅度下降，使活体大量繁殖昆虫病原线虫成为可能。活体繁殖需要培养介质，据国外文献报道主要采用滤纸做介质，存在不容易控制湿度、单位面积产量较低的问题。申请号为“2006100165635”、名称为“工厂化昆虫病原线虫活体高倍繁殖方法”的专利申请，公开了昆虫病原线虫繁殖采用蛭石做介质，繁殖容器为布袋和尼绒袋，需要定期喷水来保持湿度，线虫繁殖进展情况不易观察，蛭石做介质虽然控制湿度方便，但成本较高。

发明内容

为了解决昆虫病原线虫繁殖速度慢、成本高、产量低的问题，本发明提供了一种快速、环保、低成本的昆虫病原线虫的繁殖方法，其所采取的技术方案为：

该繁殖方法的具体步骤如下：

(1)对干植物碎屑进行高压湿热灭菌处理；

(2)处理后的植物碎屑放凉，然后加入水搅拌均匀，所加水的重量与干植物碎屑的重量比为1.5～2.5∶1；

(3)加水后的植物碎屑装入透明培养容器内，该培养容器的容量为加水后植物碎屑体积量的1.5～2倍，然后在培养容器内依次加入黄粉虫活体和每毫升含12000～15000条昆虫病原线虫的悬浮浓液，所加黄粉虫活体的重量与干植物碎屑的重量比为1∶2～4，所加悬浮浓液的体积量为每10克黄粉虫活体配比1/3毫升悬浮浓液；

(4)把培养容器封口，并使容器口留有空隙保持通气，然后放置在温度为25～28℃的培养室内进行繁殖培养，培养期的第2、3天各摇动培养容器一次；

(5)当观察到培养容器内壁上爬满昆虫病原线虫时繁殖培养完成，即可进行水洗收获或者直接使用。

上述植物碎屑包括树木锯末、枝条粉碎物以及作物秸杆粉碎物的任一种或者混合物。

上述培养容器为透明的玻璃瓶、塑料瓶、塑料袋和塑料盒的任一种。

上述步骤(5)中的水洗收获是把培养容器内全部培养物倒入100～200目的细筛内，然后浸泡在清水表层中，使昆虫病原线虫爬入清水内，待线虫沉淀后把上部清水倒掉，进而收集繁殖培养后的昆虫病原线虫。

本发明采用透明玻璃瓶、塑料瓶、塑料袋和塑料盒中的一种作为繁殖容器，易于观察；采用黄粉虫活体作为寄主昆虫，成本低；采用晒干或者烘干的树木锯末或枝条粉碎物或棉花、玉米、小麦、水稻、大豆、花生等作物秸杆粉碎物作为培养介质，原料易得；采用灭菌设备进行灭菌，使用控温培养室进行培养，使用仪器设备少；所加悬浮浓液为少量的清水中加昆虫病原线虫活体混合而成，该悬浮浓液有利于昆虫病原线虫的存活，并便于昆虫病原线虫的加入。

与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1、原料易得、价格便宜，操作简便，使用仪器设备少，可进行大规模工业化生产，节约水电与人工，投资成本很低。

2、以植物碎屑做培养介质，可以解决目前农林废弃物的处理问题，可不需经过专门清洗和冷链贮运直接施用防治害虫，培养介质还对植物具有一定的肥效，既对人类和植物有益，又不污染环境，符合农业可持续发展。

3、通过该方法繁殖培养的昆虫病原线虫，产率和成活率高，侵染害虫具有很强的致病力，生产周期短，仅需7～15天，有利于昆虫病原线虫生物防治农业、林业、果树、蔬菜、草坪等害虫技术的实施与推广。

具体实施方式

下面以树木锯末为实施例对本发明做进一步说明：

该昆虫病原线虫繁殖方法步骤具体如下：

(1)把树木锯末晒干或烘干，制成100克干锯末作为植物碎屑，然后使用灭菌设备对干锯末进行高压湿热灭菌；

(2)处理后的锯末放凉，然后加入200克水搅拌均匀；