[发明专利]一种高通量筛选谷氨酸高产菌株的方法

权利要求书

1.一种高通量筛选谷氨酸高产菌株的方法，其特征在于：

(1)从自然界分离或通过人工改造的谷氨酸产生菌样品，涂布到选择平板，28-35℃培养48-72h；

(2)微孔培养板初筛：挑选在平板生长的单菌落，接种到含种子培养基的微孔培养板，28-35℃摇床培养12-24h，转接至含发酵培养基的微孔培养板，28-35℃摇床培养32-48h，测定液体中谷氨酸的含量；

(3)摇瓶复筛：将上述产谷氨酸含量高的菌株接种到含种子培养基的摇瓶中，28-35℃摇床培养8-12h后，转接至含发酵培养基的摇瓶发酵40-50h，检测发酵液中谷氨酸含量，选出高产菌株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的选择平板，平板培养基是含有限制因素的选择性平板，筛选限制因素为：高糖，或高谷氨酸，或谷氨酸唯一碳源、或抗性：磺胺胍、酮基丙二酸、丙二酸、香豆素抗性，或琥珀酸敏感型，或营养缺陷型：异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸缺陷型，或低pH耐受性，或高pH耐受性。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述种子培养基由下述成分组成：葡萄糖15-25g、K₂HPO₄ 0.5-2.5g、MgSO₄ 0.3-6g、FeSO₄ 1-10mg、MnSO₄1-15mg、尿素1-3g、玉米浆20-35g，定容至1L，pH 7.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述发酵培养基由下述成分组成：葡萄糖100-150g、K₂HPO₄ 0.5-1.5g、MgSO₄ 0.1-6g、FeSO₄ 1-5mg、MnSO₄1-5mg、硫胺素0.01-0.1mg、尿素3-10g、玉米浆1-10g，定容至1L，pH 7.0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于用微孔培养板初筛时，采用的微孔培养板是24孔或48孔或96孔或384孔的方形深孔板，装液量为0.8-1.2mL，发酵培养的接种量是5％-10％，摇床转速是200-300rpm，并在发酵培养12-24h时，补加质量浓度10％-20％的尿素50-100μL，继续发酵20-36h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于摇瓶复筛时，种子培养采用250mL三角瓶，装液量10-30mL；发酵培养采用500mL三角瓶，装液量10-50mL，接种量2.5％-10％，培养在200-250rpm的旋转式摇床、或90-150rpm的往复式摇床上进行，根据发酵液中指示剂颜色变化，补加质量浓度10％-40％的尿素3-8次，每次加量100-800μL，发酵40-50h后，检测发酵液中谷氨酸含量。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述发酵培养基，在摇瓶发酵时，发酵培养基中添加0.01-0.1g/L的酸碱指示剂，酸碱指示剂选用酚红、中性红、甲酚红或溴甲酚紫。