[发明专利]针对在细胞表面表达的蛋白质的抗体制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及从抗体文库离析针对在细胞表面表达的蛋白质的抗体的方法以及利用该方法制作的抗体。

背景技术

抗体通过识别特定的抗原，引发各种生物体内现象，作为生物体内防御的中坚力量发挥着重要的作用。特别是利用抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC；antibody dependent cell-mediated cytotoxicity)活性、补体依赖性细胞毒性(CDC；complement dependent cytotoxicity)活性对癌细胞等的清除有效，因此用于作为抗癌剂的用途。着眼于这样的抗体的作用而实用化的抗体制剂也很多，显示良好的治疗效果的制剂也不少。进而，除了作为医药制剂的用途以外，例如作为各种诊断检查试剂、或者研究开发上有效的工具而广泛使用。因此需要制作将在各种生物体内现象中发挥重要作用的蛋白质作为抗原来识别的抗体。

作为在生物体内现象中发挥重要作用的蛋白质，可以举出贯通细胞膜的蛋白质(以下称为跨膜蛋白)。跨膜蛋白可以举出例如各种受体蛋白、离子通道蛋白等。由于其中的大多数与细胞内外的信息、物质的传递、移动相关，从而对细胞的生存、增殖、分化等发挥重要的作用，因此，制作能够识别该跨膜蛋白的抗体对上述医药制剂、诊断检查试剂或研究开发工具具有极大的意义。

目前，作为针对任意抗原的抗体制作方法已经开发了各种方法(杂交瘤制作法、DNA免疫法、噬菌体展示法等)。特别是近年来，作为大量且容易地生产具有高特异性的抗体的技术，被称为ADLib体系(或ADLib法)的方法正在受到关注(参照专利文献1、非专利文献1)。根据该方法，可以利用简便的方法提供具有所需的特异性和亲和性的抗体。

但是，利用上述各种抗体制作方法的针对跨膜蛋白的抗体制作存在如下的问题。

将表达了跨膜蛋白的细胞作为抗原对免疫动物直接给药而引起免疫反应的方法中，该跨膜蛋白在表达细胞膜上表达生理性的立体结构，但是该表达细胞在生物体内受到蛋白质分解，所以对生理条件下的跨膜蛋白难以制成抗体。

DNA免疫法是将跨膜蛋白的cDNA整合到适当的用于哺乳类动物细胞的表达载体，将该载体直接对免疫动物进行给药的方法(参考非专利文献2)。根据该方法，虽然具有在生物体内再现该跨膜蛋白的细胞膜上的立体结构的可能性，但是该蛋白质的作用机理的不清楚的点很多，不清楚对生理条件下的跨膜蛋白是否能够制作抗体。

噬菌体展示法是在作为大肠杆菌病毒的一种的纤维状噬菌体的外壳蛋白质上以不失去噬菌体的感染能力的方式将抗体的可变区域基因表达为融合蛋白的体系(参考非专利文献3、4)。在该方法中，使噬菌体粒子与跨膜蛋白反应而选择所需的抗体时，需要使用纯化的跨膜蛋白，并且不能保证作为目标的跨膜蛋白是否保持着生理功能。

这些问题在通过在免疫细胞中促进体细胞同源重组而在该免疫细胞表面呈示多样的抗体分子的ADLib法中也同样存在，并且针对生理状态下的纯化困难的跨膜蛋白的抗体的选择不一定容易。

如上所述，针对跨膜蛋白的抗体制作在任何制作方法中都困难。

专利文献

专利文献1：国际公开公报WO2004/011644

非专利文献

非专利文献1：Seo等，Nature Biotech.23：731-735，2005

非专利文献2：Tang等，Nature 356：152，1992

非专利文献3：McCafferty等，Nature 348：552-554，1990

非专利文献4：Marks等，J.Mol.Biol 222：581-597，1991

发明内容

本发明的发明人鉴于上述情况进行了深入研究，结果在利用在细胞表面上表达跨膜蛋白和标记蛋白的细胞，从抗体集团制备针对跨膜蛋白的抗体上取得了成功。

因此，本发明的目的在于提供针对在细胞表面上表达的蛋白质、特别是跨膜蛋白的抗体制作方法。