[发明专利]免疫学测定方法和测定用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及使用结合有物质的微小粒子的免疫学测定方法。尤其涉及主要在工业、环境和临床检查领域中的、利用了抗原抗体反应的微量成分的免疫学测定方法以及免疫学测定用试剂盒。

背景技术

近年来，在临床检查等各种检查中，正谋求自动化和测定时间的缩短。作为这样的检查方法，利用免疫反应的测定方法正在被广泛使用来用于测定生物试料中的物质。作为免疫学测定方法，有放射免疫测定(RIA)法、酶免疫测定(EIA)法、比浊免疫测定法、乳胶凝集法、胶体金凝集法、免疫色谱法等多种方法。其中，乳胶凝集法或胶体金凝集法由于可在无需反应液的分离、洗涤操作的均相体系中测定，所以适于测定的自动化和在短时间内的测定。尤其是胶体金粒子为5nm～100nm的大小，其小于乳胶粒子，因而可用于更微量物质的测定(专利文献1和2)。

这些测定方法中的主反应成分是结合了与被测定物特异地反应(例如结合)的物质的乳胶粒子或胶体金粒子等微小粒子。当与结合在微小粒子上的被测定物特异地反应的物质具有复数个与被测定物特异地反应的部位时，通过使与结合在微小粒子上的被测定物特异地反应的物质与被测定物反应，从而使微小粒子发生凝集，由该凝集程度算出被测定物的浓度。

但是，当与结合在微小粒子上的被测定物特异地反应的物质与被测定物特异地反应的部位只有一处时，即使该物质与被测定物反应，也只是在其一处发生反应(例如结合)，因而不发生微小粒子的凝集。因此，利用竞争法来测定被测定物，所述竞争法即通过使具有复数个与被测定物反应的部位的竞争体(competitor)在测定体系中共存，而使微粒发生凝集，测定依赖于被测定物浓度的凝集程度。

或者，示出如下方法：在通过使乳胶粒子或胶体金粒子等微小粒子(该微小粒子结合有复数个被测定物或被测定物的类似物)和物质(该物质是与被测定物特异地结合的物质)反应而发生凝集的反应体系中，通过共存被测定物，从而抑制其凝集反应，通过测定该抑制的程度来测定被测定物的方法(非专利文献1)。在该方法中，当以单体形式使用抗体作为与被测定物特异地结合的物质时，由于被测定物、或者结合有复数个半抗原的乳胶粒子或胶体金粒子与抗体的结合而发生的凝集不充分，有时得不到实用的测定灵敏度。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2005-283250号公报

专利文献2：日本特开2004-325192号公报

非专利文献

非专利文献1：山田满广，医疗和检查机器及试剂(医療と検查機器·試薬)，19卷，4号，523-528页，1996年

发明内容

发明要解决的课题

本发明的目的在于提供一种测定方法和测定用试剂盒，所述方法为利用使用微小粒子的以往的反应体系的测定方法，即，在通过使乳胶粒子或胶体金粒子(该乳胶粒子或胶体金粒子结合有复数个被测定物或被测定物的类似物)与物质(该物质是与被测定物特异地结合的物质)反应来发生凝集的反应体系中，通过共存被测定物来抑制其凝集反应，并测定该抑制的程度的被测定物的测定方法，其中，使其测定灵敏度提高，而且可在更宽的浓度区域内测定被测定物。

解决课题的手段

本发明发现在上述测定方法中，不以单体形式使用与被测定物特异地结合的物质、而是使用结合有复数个该特异地结合的物质的复合体，从而显著促进与结合有复数个被测定物或被测定物的类似物的微小粒子的凝集反应，被测定物的测定灵敏度显著上升，从而完成了本发明。即，本发明是基于如下现象的测定方法：使上述复合体、结合有复数个被测定物或被测定物的类似物的微小粒子、和样本中的被测定物在反应液中共存来使凝集反应发生，以依赖于源自样本的被测定物的浓度的方式抑制凝集反应。

本发明提供测定样本中的被测定物的方法，该方法包括

(a)将含有该被测定物的样本、具有复数个与该被测定物特异地结合的物质的复合体、和在不溶性载体上结合有该被测定物或该被测定物的类似物的微小粒子混合的工序；和

(b)在由该工序(a)得到的该混合液中，测定该微小粒子的凝集反应的工序。

本发明还提供测定用试剂盒，该试剂盒包括

第一试剂，其包含具有复数个与被测定物特异地结合的物质的复合体；和

第二试剂，其包含在不溶性载体上结合有该被测定物或该被测定物的类似物的微小粒子。

在一个实施方式中，上述复合体是结合有复数个抗上述被测定物的抗体的物质。

在另一实施方式中，上述被测定物是半抗原，而且上述被测定物的类似物是半抗原结合蛋白。