[发明专利]产生甲硫氨酸而不产生N-酰基甲硫氨酸

权利要求书

1.一种在发酵方法中产生甲硫氨酸或其前体的方法，包括下述步骤：

-在包含碳源、硫源和氮源的适当培养基中培养修饰的微生物，和

-从培养基回收甲硫氨酸和/或其衍生物，

其中N-酰基甲硫氨酸的累积相对于未经修饰的微生物和/或方法减少。

2.权利要求1的方法，其中累积减少的N-酰基甲硫氨酸选自下组：N-乙酰甲硫氨酸、N-丙酰甲硫氨酸、N-丁酰甲硫氨酸及其组合。

3.权利要求1的方法，其中所述N-酰基甲硫氨酸累积的减少是通过下述修饰之一实现的：

○减弱至少一种甲硫氨酸转酰基酶的表达，和/或

○表达至少一种甲硫氨酸特异性氨基酰基酶或增强至少一种甲硫氨酸

特异性氨基酰基酶的表达；和/或

○改变培养条件。

4.权利要求3的方法，其中其表达减弱的甲硫氨酸转酰基酶是由选自下组的基因编码的：yncA、argA、yjdJ、yfaP、yedL、yjhQ及其组合。

5.权利要求4的方法，其中其表达减弱的甲硫氨酸转酰基酶是由基因yncA编码的。

6.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸的产生通过将选自下组的至少一种天然或异源的N-酰基-L-氨基酸酰胺水解酶在微生物中表达来减少：

a.曲霉属(Aspergillus)N-酰基氨基酸酰基酶

b.猪N-酰基氨基酸酰基酶

c.由argE基因编码的乙酰鸟氨酸脱乙酰酶。

7.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸的产生通过调适选自下组的培养条件来减少：pH，加氧(oxygenation)和/或温度，或通过将N-酰基氨基酸酰基酶添加入培养基来减少。

8.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸的产生通过下述来减少：

a)减弱至少一种下述编码甲硫氨酸N-酰基转移酶的基因的表达：yncA、argA、yjdJ、yfaP、yedL、yjhQ，和

b)表达至少一种天然或异源的N-酰基甲硫氨酸脱酰基酶，如：

a.曲霉属N-酰基氨基酸酰基酶

b.猪N-酰基氨基酸酰基酶

c.由argE基因编码的乙酰鸟氨酸脱乙酰酶。

9.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸产生通过如下来减少：减弱至少一种下述编码甲硫氨酸N-酰基转移酶的基因的表达：yncA、argA、yjdJ、yfaP、yedL、yjhQ，并且调适工艺条件，如pH，加氧和/或温度，或将氨基酸酰基酶添加入培养基。

10.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸产生通过如下来减少：表达至少一种天然或异源的N-酰基甲硫氨酸酰基酶，如：

a.曲霉属N-酰基氨基酸酰基酶

b.猪N-酰基氨基酸酰基酶

c.由argE基因编码的乙酰鸟氨酸脱乙酰酶；

以及调适工艺条件，如pH，加氧和/或温度，或将氨基酸酰基酶添加入培养基。

11.权利要求3的方法，其中N-酰基甲硫氨酸产生通过如下来减少：

-减弱至少一种下述编码甲硫氨酸N-酰基转移酶的基因的表达：yncA、argA、yiiD、yhhY、yjdJ、yfaP、yedL、yjhQ，和

-表达至少一种天然或异源的N-酰基甲硫氨酸酰基酶，如：

a.曲霉属N-酰基氨基酸酰基酶

b.猪N-酰基氨基酸酰基酶

c.由argE基因编码的乙酰鸟氨酸脱乙酰酶。和

-调适培养条件，如pH，加氧和/或温度，或将氨基酸酰基酶添加入培养基。

12.权利要求1的方法，其中培养基中的硫源是硫酸盐、硫代硫酸盐、硫化氢、连二硫酸盐、连二亚硫酸盐、亚硫酸盐、甲硫醇、二甲基二硫化物或所述不同来源的组合。

13.权利要求1的方法，其中培养基中的硫源是硫酸盐或硫代硫酸盐，或两者的混合物。

14.权利要求1的方法，其中所述碳源来源于可再生原料。

15.权利要求1的方法，其中所述碳源是葡萄糖或蔗糖。

16.权利要求1的方法，其中所述氮源以铵或氨的形式供应。