[发明专利]从胚珠进行麻风树的体细胞胚发生

权利要求书

1.一种经由体细胞胚发生再生麻风树的方法，包括步骤：

(a)在包括MS基本培养基和2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D)的第一培养基中暗培养麻风树外植体，以诱导形成胚性愈伤组织，其中麻风树外植体是切开的未开放花芽的胚珠；

(b)在所述第一培养基中在光/暗光周期培养所述胚性愈伤组织，以诱导体细胞胚发育和成熟；和

(c)在包括MS基本培养基、吲哚丁酸(IBA)和赤霉酸(GA₃)的第二培养基中在光/暗光周期培养成熟的体细胞胚，以萌发小植株。

2.如权利要求1所述的方法，其中培养时间为：

第一培养基中大约30天至大约60天，以诱导胚性愈伤组织的形成；

第一培养基中大约4天至大约6周，以使体细胞胚发育和成熟；和

第二培养基中大约1周至大约3周，以萌发小植株。

3.如权利要求2所述的方法，其中在每种培养基中培养的时间为：

第一培养基中大约40天，以诱导胚性愈伤组织的形成；

第一培养基中大约4周，以使体细胞胚发育和成熟；和

第二培养基中大约2周，以萌发小植株。

4.如权利要求1所述的方法，其中培养时间为：

第一培养基中大约30天至大约60天，以诱导胚性愈伤组织的形成；

第一培养基中大约4周至大约6周，大约每2周继代培养，以使体细胞胚发育和成熟；和

第二培养基中大约1周至大约3周，大约每2周继代培养，以萌发小植株。

5.如权利要求4所述的方法，其中在每种培养基中培养的时间为：

第一培养基中大约40天，以诱导胚性愈伤组织的形成；

第一培养基中大约4周，以使体细胞胚发育和成熟；和

第二培养基中大约2周，以萌发小植株。

6.如权利要求1所述的方法，其中第二培养基还包含一种或多种细胞分裂素、一种或多种有机添加剂或一种或多种细胞分裂素和一种或多种有机添加剂的混合物。

7.如权利要求6所述的方法，其中细胞分裂素是激动素(KN)、6-苄基氨基嘌呤(BA)、噻苯隆(TDZ)或其混合物。

8.如权利要求6所述的方法，其中有机添加剂是干酪素水解物(CH)、硫酸腺嘌呤(AdSO₄)或其混合物。

9.如权利要求6所述的方法，其中(a)细胞分裂素是激动素(KN)、6-苄基氨基嘌呤(BA)、噻苯隆(TDZ)或其混合物和(b)有机添加剂是干酪素水解物(CH)、硫酸腺嘌呤(AdSO₄)或其混合物。

10.如权利要求1所述的方法，其中培养基包括：

第一培养基：MS基本培养基和大约2.26μM至大约9.04μM2，4-D；和

第二培养基：MS基本培养基、大约1.23μM至大约4.92μM IBA和大约0.72μM至大约5.76μM GA₃。

11.如权利要求10所述的方法，其中培养基包括：

第一培养基：MS基本培养基和大约6.78μM 2，4-D；和

第二培养基：MS基本培养基、大约2.46μM IBA和大约2.88μM GA₃。

12.如权利要求7所述的方法，其中一种或多种细胞分裂素浓度是：

(a)大约1.16μM至大约9.28μM KN；

(b)大约1.10μM至大约8.86μM BA；

(c)大约1.13μM至大约9.08μM TDZ；

(d)大约1.16μM至大约4.64μM KN和大约1.10μM至大约4.43μM BA；

(e)大约1.10μM至大约4.43μM BA和大约1.13μM至大约4.54μM TDZ；或

(f)大约1.16μM至大约4.64μM KN和大约1.13μM至大约4.54μM TDZ。