[发明专利]纯化促红细胞生成素的方法

权利要求书

1.纯化促红细胞生成素的方法，其中将产生促红细胞生成素的真核细胞的包含促红细胞生成素的培养上清进行以下步骤：

a)移除细胞组分；和

b)以规定的顺序通过以下色谱步骤处理a)的产物

i)反相色谱；

ii)阴离子交换色谱；

iii)羟基磷灰石色谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤a)之前以及步骤a)至b iii)之间没有使用其他色谱方法。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述产生促红细胞生成素的真核细胞是哺乳动物细胞，优选人细胞，并且特别优选表达人重组促红细胞生成素的中国仓鼠卵巢细胞。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其特征在于将产品质量与参考材料不相应的那些洗出液部分额外地进行另外的i)的反相色谱和/或ii)的阴离子交换色谱和/或iii)的羟基磷灰石色谱。

5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其特征在于在步骤i)、ii)和/或iii)之后进行超滤。

6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其特征在于步骤a)包括微滤和随后的超滤。

7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述反相色谱在作为固定相的载体材料上进行，所述载体材料选自C₁-至C₈-改性的硅胶、基于聚苯乙烯/二乙烯基苯的疏水聚合载体以及硅胶或聚合物基底上的疏水整体相材料组成的组中，并且其中将水性链烷醇溶液用作洗脱液。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述阴离子交换色谱在作为固定相的载体材料上进行，所述载体材料带有选自二乙氨基乙基(DEAE)、季氨基乙基(QAE)、季铵基团或二甲氨基乙基(DMAE)的官能团。

9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述阴离子交换色谱包括至少一个洗涤步骤，所述洗涤步骤使用水性缓冲体系。

10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述阴离子交换色谱包括至少一个洗涤步骤，所述洗涤步骤使用基于有机酸的缓冲体系。

11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述阴离子交换色谱包括至少一个洗涤步骤，所述洗涤步骤使用pH值为3.5至5.5的水性缓冲溶液。

12.根据权利要求1至11中任一权利要求所述的方法，其特征在于用于所述阴离子交换色谱的洗脱液是无机酸的水性缓冲溶液。

13.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的方法，其特征在于用于所述阴离子交换色谱的洗脱液是氯离子的水性缓冲溶液。

14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述羟基磷灰石色谱包括至少一个洗涤步骤，所述洗涤步骤使用基于有机酸的缓冲体系。

15.根据权利要求1至14中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述羟基磷灰石色谱包括至少一个洗涤步骤，所述洗涤步骤使用乙酸缓冲液。

16.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的方法，其特征在于用于所述羟基磷灰石色谱的洗脱液是基于无机酸的缓冲体系。

17.根据权利要求1至16中任一权利要求所述的方法，其特征在于用于所述羟基磷灰石色谱的洗脱液是磷酸缓冲液。