[发明专利]稳定蛋白和多肽的方法

权利要求书

1.一种在适当的生物体中通过用表达载体转化而制备具有改善的稳定性的多肽序列、其功能衍生物或片段的方法，所述多肽包括至少一个单可变结构域，所述表达载体包含能够产生所述多肽的重组基因，所述方法包括以下的步骤：

a)如果存在N-末端E(E1)或N-末端Q(Q1)，则用另一个天然存在的氨基酸替换所述N-末端E(E1)或N-末端Q(Q1)；和/或

b)如果存在至少一个易于氧化的M，用另一个天然存在的氨基酸替换所述至少一个易于氧化的M；和/或

c)如果存在至少一个易于异构化的N或D，用另一个天然存在的氨基酸替换所述至少一个易于异构化的N或D。

2.一种制备具有改善的化学稳定性的多肽序列的方法，其中所述方法包括以下步骤：

a.从亲代多肽生成突变的多肽序列、其功能衍生物或片段的文库，其中所述的亲代多肽包括至少一个单可变结构域，并且其中所述亲代多肽在CDR区中具有DS，DG，NG或NS基序，或在具有接近不稳定的N或D的H-供体基团的表面暴露区中具有DS，DG，NG或NS基序，并且其中一些所述突变多肽序列的氨基酸序列以下列的方式被改变：

i.如果存在N-末端E(E1)或N-末端Q(Q1)，用D替换所述N-末端E(E1)或N-末端Q(Q1)；和/或

ii.如果存在至少一个易于氧化的M，用A或T替换所述至少一个易于氧化的M；和/或

iii.如果存在所述DS，DG，NG或NS基序的D或N，用Q或E替换所述DS，DG，NG或NS基序的D或N；

b.和筛选所述已生成的文库的具有高亲和性或抗体亲抗原性的多肽序列；

c.和任选地选择一个或几个具有所述高亲和性或抗体亲抗原性的突变多肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述DS，DG，NG或NS基序在CDR区。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述DS，DG，NG或NS基序在CDR2或CDR3区中。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述DS，DG，NG或NS基序在CDR3区中。

6.根据权利要求2，3，4或5所述的方法，其中所述高亲和性或抗体亲抗原性表示为与其靶分子的解离常数，并且所述解离常数等于或小于100nM。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述解离常数等于或小于10nM。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述解离常数等于或小于1nM。

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中所述多肽基本上由纳米抗体或其构建体组成。

10.突变体文库，其由根据权利要求1-9所述的任意一种方法生成。

11.核苷酸，其用于根据权利要求1-9所述的任意一种方法以生成突变体。

12.包含权利要求11所述的核苷酸的宿主细胞。

13.包括权利要求10所述的突变体文库的筛选方法。

14.一种选自由SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26组成的组的多肽。

15.一种选自由SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34组成的组的核苷酸序列。

16.一种由权利要求8所述的核苷酸序列编码的多肽。