[发明专利]一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法

权利要求书

1. 一种采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）肽-寡核苷酸修饰磁珠：

以γFe₂O₃和Fe₃O₄磁性材料合成的均一、超顺磁、单发散性多聚微球为磁性来源，每个微球体包被一层聚苯乙烯，通过乳液聚合或者分散聚合的方法制备携带羧酸盐的磁性高分子微球；经羧酸盐修饰的聚苯乙烯核心粒子表面覆被一层磁铁，oligo（dT）₁₄再共价结合在此表面上，核酸分子能够很好的锚定在此寡核苷酸上；

（2）细胞裂解：将含有靶核酸的待分离样品加入离心管中，再加入裂解液裂解细胞，以释放核酸；

（3）核酸吸附：向溶液中加入肽-寡核苷酸修饰的磁珠，核酸被磁珠表面吸附，蛋白质以及其他的杂质则不被吸附；将离心管置于磁性分离器，磁珠吸附于试管壁；

（4）去除杂质：加入水相缓冲液，对表面吸附有核酸并附着于试管壁的磁珠进行洗涤，将磁珠上的杂质冲洗分离；

（5）核酸回收：吸附在磁珠表面的核酸直接作为PCR扩增的模板，或者加入洗脱液，使吸附在磁珠表面的核酸分子解吸，进入洗脱液中，再用于下游实验。

2. 根据权利要求1所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述磁珠表面修饰以不同配基，作为吸附和结合相应分子的载体；

所述配基为羧酸盐和寡核苷酸。

3. 根据权利要求1所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述核酸为双链或单链DNA、RNA。

4. 根据权利要求1或2所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述裂解液为含表面活性剂的溶液。

5.根据权利要求4所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述含表面活性剂的溶液为含0.01%～10%的SDS、LLS、Chelex-100 、Triton X-100 、Tween 20 或NP-40的溶液。

6. 根据权利要求1或2所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述磁珠溶液是指pH6.5±0.2，由100mmol/L～2M/L的HEPES和100mmol/L～2M/L NaCl构成的缓冲溶液。

7.根据权利要求1或2所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述水相缓冲液为由0.1%到2%（体积比）的Triton X-100、100mmol/L～2M/L的NaCl、KCl或LiCl组成的溶液。

8.根据权利要求1或2所述的采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法，其特征在于，所述洗脱液为10mM Tris-HCl和 1mM EDTA，pH8.0的溶液。

9. 一种如权利要求1或2所述采用磁珠从样品中提取并纯化核酸的方法在病原微生物的诊断、法医学分析、组织和血液分型、基因突变检测、基因测序中的应用。