[发明专利]脂氧素在治疗激素依赖型哮喘中的应用

说明书

技术领域：

本发明属于医药领域，涉及激素依赖型哮喘的治疗药物，具体涉及机体内源性促进炎症缓解的脂质——脂氧素(Lipoxins)在激素依赖型哮喘治疗中的应用。

背景技术：

哮喘是以气道炎症和高反应性为特征的呼吸系统疾病，众多炎症介质、活性氧及酶参与了其发生与发展，慢性患者甚至伴有气道重塑。随着人们对哮喘发生发展机制的认识深入，哮喘的治疗方案也由单用短效β2受体激动剂、吸入性糖皮质激素，发展到今天两种或多种药物的合并治疗。

可以肯定，糖皮质激素已成为哮喘治疗的首选药物，在控制哮喘中发挥着重要作用。然而，临床上仍有不少患者对其不敏感，需要长期大剂量口服激素来控制症状，停药或减量即可导致哮喘复发或加重，此类哮喘被称为激素依赖型哮喘。由于此类患者必须长期大量使用糖皮质激素，使体内的糖皮质激素受体下调、亲和力下降，从而影响气道炎症的控制，导致哮喘反复发作，迁延不愈。

发明内容

本发明的任务是提供一种治疗激素依赖型哮喘的药物，使其具有提高激素治疗哮喘的疗效，降低其剂量和副作用等特点，以克服现有技术的不足。

实现本发明的技术方按是：

本发明提供的这种治疗激素依赖型哮喘的药物是脂氧素。

为了降低激素依赖型哮喘患者对糖皮质激素的敏感性，减轻激素依赖的副作用，本发明提供了一种机体内源性的脂质介质——脂氧素，该物质可以通过抑制多药耐药相关蛋白而增加患者对激素的敏感性，从而提高激素治疗哮喘的疗效，降低其剂量和副作用。

本发明揭示了脂氧素对多药耐药相关蛋白的影响，及其与哮喘治疗的相关性。结果发现，在培养的巨噬细胞中，脂氧素能明显抑制多药耐药相关蛋白的表达，并能促进噬酸性粒细胞的凋亡。同时，本发明在整体实验中还发现，脂氧素配合激素能降低重度哮喘小鼠的气道反应性，同时，肺功能降低和肺组织形态学变化都明显较单用激素治疗组轻。

本发明披露了脂氧素能明显提高激素依赖型哮喘个体对激素的敏感性，与激素合用能有效治疗激素依赖性哮喘。脂氧素能作为治疗激素依赖型哮喘的药物，用于治疗激素依赖型哮喘。

本发明实验资料

试剂配制

脂多糖和脂氧素分别于临用前用1640培养基配成相应浓度。

细胞实验

实验方法

1)巨噬细胞株：分别培养小鼠RAW267.4巨噬细胞株，细胞常规培养后接种于6孔板，无血清培养基培养18小时后，按下列分组进行实验：空白对照组、脂多糖(100ng/ml)组、脂多糖(100ng/ml)+脂氧素(100nmol/L)组，刺激24小时后，分别采用Real time PCR和酶联免疫法，检测细胞内多药耐药相关蛋白的基因与蛋白表达。

2)原代巨噬细胞：常规方法提取小鼠腹腔巨噬细胞，细胞常规培养后接种于6孔板，无血清培养基培养18小时后，后续实验同于上述巨噬细胞株。

3)巨噬细胞白三烯外排实验：采用小鼠RAW267.4巨噬细胞株，上述方法培养和分组后，采用酶联免疫法，检测细胞上清液中的白三烯C4含量。

实验结果

1)Real time PCR和酶联免疫法分别显示，脂多糖刺激能明显促进小鼠巨噬细胞株和原代巨噬细胞多药耐药相关蛋白在基因水平和蛋白水平的表达，而加用脂氧素后，多药耐药相关蛋白的表达明显减少，与单用脂多糖组相比差异具有统计学意义(见图1)。

2)酶联免疫法显示，脂多糖作用组白三烯的含量明显高于对照组，而脂氧素作用组，此含量显著低于单用脂多糖组(见图2)。

实验证实脂氧素能明显抑制多药耐药相关蛋白的表达，同时伴有细胞白三烯的外排的减少。

整体实验

实验方法

1)实验动物：6～8周龄雌性清洁级Balb/C小鼠，购于华中科技大学同济医学院实验动物中心，体重17-20g。采用随机数字表法将小鼠分成4组，分别为空白对照组、模型组、激素治疗组和脂氧素与激素合用组。每组动物12只。

2)重度哮喘模型制备：于实验第1天和第14天向小鼠腹腔内注射致敏液(0.08％的卵白蛋白和等体积液态铝混合)0.2ml，第15天起将小鼠置于透明密闭容器中，用1％的卵白蛋白溶液10ml雾化吸入，每次20分钟，隔日1次，连续给35天，并分别于21、35和49天以1.0×10⁹pfu/L的呼吸道合胞病毒50μl滴入鼻腔，每日观察小鼠症状。空白对照组以磷酸盐缓冲溶液代替卵白蛋白；

3)给药方式：雾化吸入