[发明专利]对虾非特异免疫增强剂寡肽的制备与应用

说明书

技术领域：

本发明属于对虾配合饲料的配制技术，是一种提高对虾非特异免疫增强 剂的制备与应用。

背景技术：

长期以来，蛋白质一直是动物营养学家关注的重点。传统的蛋白质代 谢理论认为，蛋白质必须水解成游离氨基酸后才能被吸收利用。肽是分子 结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，氨基酸是构成肽的基本基团， 一般把肽链中氨基酸残基数量为2～10的称寡肽(OP)，小肽(SP)则多指由 2～3个氨基酸组成的二肽和肽；按肽所发挥的功能可将小肽分为两大类： 功能性肽和营养性肽。功能性肽指能参与调节动物的某些生理活动或具有 某些特殊作用的肽，如诱食肽、抗菌肽、免疫肽、抗氧化肽、激素肽、促 生长肽。

蛋白质在酶解过程中可以产生一些具有特殊生理功能的生物活性肽。 这些生物活性肽在调节胃肠道运动、调节免疫系统、抗高血压、抗菌、抗 血栓、抗病毒、抗癌、清除自由基和促进矿物元素吸收等方面发挥着重要 作用。李清等(饲料研究2005)在成鲤日粮中添加不同比例的小肽后，发 现随着小肽用量的增加，成鲤血液中免疫球蛋白IgM和补体C逐渐升高，尿 素氮(BUN)水平明显低于对照组，证明小肽减少了尿素在肾脏中的沉积，提 高了成鲤肌肉蛋白质的沉积率，降低肾脏尿素中毒的可能性，从而发挥了 蛋白质提高免疫力的作用。另外成鲤的肾脏重量随着小肽用量的增加而增 重，可认为小肽促进了免疫器官的发育。许培玉等(中国饲料，2004)发 现，饲粮中添加1％的小肽制品可显著提高南美白对虾溶菌酶和超氧化物歧 化酶(SOD)的活力，但没有进行攻读实验，而且对对虾的生长没有显著的促 进作用。

发明内容：

本发明的目的是提出一种利用太平洋狭鳕鱼碎肉制备蛋白寡肽的酶解 工艺方法，获得不同分子量小于100kDa为30％的蛋白寡肽。将此寡肽添加 于对虾饲料中，替代5％的鱼粉，可提高对虾的非特异性免疫活性，促进生 长。

本发明是按以下操作技术完成的：1.寡肽的制备，2.寡肽作为对虾 免疫增强剂的适宜用量。

1.寡肽的制备：

利用太平洋狭鳕鱼碎肉，清洗，经绞肉机绞碎后投入酶反应器加温灭 菌，绞碎后升温至90℃保温、恒温水浴20min灭菌，再加水和蛋白酶酶制 剂混合，在优化的酶解工艺参数(料水比、时间、温度、pH)条件下酶解， 然后酶解液升温使蛋白酶灭活，粗滤分离骨刺，酶解液进一步三相离心分 别获得可溶性蛋白寡肽水相、不溶性蛋白沉淀和鱼油，可溶性蛋白寡肽水 相经超滤提纯，冷冻干燥后获得蛋白寡肽粉。

所述的蛋白酶酶制剂：采用Alcalase+Flavourzyme复合酶酶解方法； Alcalase酶：E/S为90AU/kg，Flavourzyme酶：E/S为15000LAPU/kg。

所述的酶解工艺参数为：酶解温度50℃～60℃、起始pH＝8.5、料水比 1∶1，酶解3h。

所述的蛋白寡肽的超滤提纯：采用了8000rpm高速离心与100kDa超滤 膜超滤提纯相结合的方法，彻底截留大分子物质，获取分子量小于100kDa 达到30％蛋白寡肽。

2.寡肽作为对虾免疫增强剂的适宜用量：

饲料中以5％寡肽替代鱼粉可以显著提高对虾的血细胞密度、酚氧化酶 活性、呼吸爆发活性、SOD活性和NOS活性及特定生长率。

本发明与已有技术对比，具有以下特点：

1.在饲料中添加寡肽作为添加剂，为可显著提高对虾非特性免疫活性。

2.在饲料中添加本发明添加剂，对对虾的生长有促进作用。

3、本发明具有使用方便，无毒副作用，无污染，无残留，用量小等特 点。

附图说明：

图1：酶解温度对狭鳕水溶性蛋白寡肽氮回收率(NR％)的影响(n＝2)； 图中酶解参数：A酶E/S＝90AU/kg、B酶E/S＝15000LAPU/kg、料水比＝1∶1、 起始pH＝7.0、酶解时间＝6h。

图2：酶解起始pH水平对狭鳕水溶性蛋白寡肽氮回收率(NR)的影响 (n＝2)，图中酶解参数：A酶E/S＝90AU/kg、B酶E/S＝15000LAPU/kg、料水 比＝1∶1、温度＝50℃、酶解时间＝6h。