[发明专利]食品中4-甲基咪唑的快速检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种食品中物质的检测方法，特别涉及一种食品中4-甲基咪唑的快速检测方法。

背景技术：

4-甲基咪唑，英文名称：4-methylimidazole，简称4-MI，分子式：C4H6N2，分子量：82.11，熔点：52～56℃，沸点：263℃，具有碱性，能和无机酸生成稳定的盐，易溶于水、甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷，微溶于苯，不溶于烃类。

4-甲基咪唑是氨(铵)法生产的焦糖色的副产物。焦糖色又称酱色，是食用色素中的一种，它是一种世界范围内广泛使用的色素，其产销量是所有食用色素中最大的，全世界每年耗量约20万吨，其中90％以上是用在食品和饮料中。从消费区域看，在美国，约95％的焦糖色用于饮料；而在亚洲，酱油和食醋是焦糖色应用得较多的两类食品，在国家质检总局公布的酱油制假典型案例中，就有直接用焦糖色、水、工业食盐勾兑的酱油，而焦糖色中可能存在的4-甲基咪唑就引发了相关的食品安全问题。因此准确、快速地测定其中4-甲基咪唑的含量对于加强食品质量安全监督具有重要的意义。

4-甲基咪唑的分析方法主要包括样品预处理和测定两个部分。

1、样品预处理方法

液-液萃取是一种传统的样品预处理技术，它利用分析组分与样品中的干扰物质在互不相溶的两种溶剂中的分配系数不同而实现分离。萃取分离使用的有机溶剂易挥发，浓缩蒸干后，将残渣溶于小体积溶剂中，能提高测定试样的浓度。目前关于样品中4-甲基咪唑的提取方法以液液萃取为主，萃取溶剂有三氯甲烷-无水乙醇(80∶20)和三氯甲烷。也有文献报道用柱层析的预处理方法，洗脱剂为二氯甲烷。

2、测定方法

(1)比色法

比色法的仪器设备和操作都比较简单，而且费用少，分析速度较快，但是其相对误差较大。4-甲基咪唑与重氮化的苯磺酸起偶合反应，生成桔黄色偶合物，通过比色进行定量。

(2)纸色谱法

纸色谱法是利用滤纸作为载体，根据被分离物质在固定相和流动相之间的分配系数不同而得到分离。纸色谱法作为一种分离手段具有设备简单，操作方便、实验条件易于一致的特点，但是分离效果受固定相的影响较大。

冯彩群探讨了焦糖色中4-甲基咪唑的纸色谱分离检测方法，检测限为0.2μg。宋慧坚用纸色谱法测定了15种焦糖色中4-甲基咪唑的含量，方法的回收率为87-90％。

(3)薄层色谱法

薄层色谱法是一种重要的分离手段，经薄层色谱分离后的有效成分斑点与标准样品斑点进行面积比以求得样品中有效成分的含量。薄层色谱法的优点是设备简单、操作方便、分离速度较快，可以分析热不稳定化合物，应用范围广。

薄层色谱法是国家标准GB8817-88测定4-甲基咪唑的方法。样品在微碱性中用有机溶剂提取，经硫酸酸化后浓缩，在碱性硅胶板上点样展开，在展开剂(乙醚∶氯仿∶甲醇(8∶2∶2))中展开后，用重氮化试剂显色，斑点呈桔黄色，根据斑点大小与颜色的深浅进行定量。

(4)气相色谱法

气相色谱法具有高柱效、高选择性，高灵敏度、用样量少、分析速度快等优点，目前已广泛应用于石油化学、化工、医药、农业、食品、环境等方面的科学研究和生产分析。它是分析复杂组分混合物的有利工具，已成为一种重要的分析手段。气相色谱法仍是最常用的4-甲基咪唑测定方法。

气相色谱常用的检测器有：热导检测器，火焰离子化检测器，电子捕获检测器，火焰光度检测器，质谱。其中常用于4-甲基咪唑的有以下两种：

(a)氢火焰离子化检测器

氢火焰离子化检测器是目前应用最广泛的色谱检测器之一，对含碳氢的有机化合物非常灵敏，能检测出10^-9g级的化合物，

Fuschs G和Sundell S用3％OV-1作为固定液，Chromosorb W作为担体制备填充色谱柱，用氢火焰离子化检测器对焦糖色中的4-甲基咪唑进行分析，方法的回收率为92-96％，相对标准偏差为2.0-2.9％，检测限为20ug/L。

Wilks RA等用7.5％Carbowax 20M和2％氢氧化钾作为固定液，Anakrom ABS作为担体制备填充色谱柱，以2-甲基咪唑作为内标物，用氢火焰离子化检测器对焦糖色中的4-甲基咪唑进行分析，方法的回收率为98-102％，相对标准偏差为1.4-1.9％，检测限为2ug/L。