[发明专利]胆固醇基-羧甲基可德兰多糖纳米粒子及制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种胆固醇基-羧甲基可德兰多糖纳米粒子及制备方法，即将水不溶性的 可德兰多糖用氯乙酸进行亲水改性，再用胆固醇与羧甲基可德兰交联形成胆固醇基-羧甲 基可德兰多糖偶合物，以及该聚合物多糖作为抗肿瘤药物载体包载药物的制备方法及其在 动物体内的作用。

背景技术：

药物传递系统(drug delivery system，DDS)是国内外医药领域的重要研究方向，特别 是与抗癌药物组成的纳米控缓释系统，运用特殊的载体将药物转变成稳定的纳米粒子，其 突出优点是纳米微粒体积小，可在血液中自由运行，具有穿过靶组织内皮细胞的能力，可 越过许多生物屏障到达病灶部位，可被肿瘤细胞摄取进入细胞内，将所包含的药物在细胞 和/或亚细胞水平释放，在降低副作用的同时大大提高了药物疗效，还可提高难溶性药物的 溶解性，增加药物与胃肠道液体的有效接触面积，有利于提高药物利用率。

作为药物载体，基于天然高分子材料制备自聚集纳米粒子得到更加广泛的关注。多糖 是自然界比较丰富的天然高分子聚合物，许多多糖还具有抗肿瘤及免疫调节活性，因此对 多糖及其衍生物进行修饰形成两亲性接枝共聚物在医药和生物技术领域有着广泛的应用。 如壳聚糖、葡聚糖、普鲁兰，可德兰多糖等，其生物相容性好、毒性低，并具有纳米粒载 体表面的修饰功能，能明显延长药物在体内的保留时间，避免吞噬细胞的吞噬，增加药物 疗效。其中可德兰多糖(Curdlan)是粪产碱杆菌通过发酵产生的一种细菌性多糖，由1，3-β 连接的D-葡萄糖单元构成的线性多糖，它有潜在的抑制艾滋病病毒感染、抗肿瘤活性、抗 凝血活性，并且在体外和体内低毒。由于可德兰在温度升高到一定程度时有形成弹性凝胶 的作用，并且它有强大的生物学活性，因此它常常被用作食品添加剂，具有良好的生物相 容性，体内可降解，是一种良好的药物载体材料。可德兰不溶于水，这样限制了它的生物 学应用。羧甲基取代是提高许多多糖功能特性的方法，可德兰的羧甲基衍生物有良好的水 溶性和生物活性。研究表明，羧甲基可德兰有抗肿瘤活性，尽管它的这种抗肿瘤作用机制 还不完全清楚(Sasaki T，et al：Cancer Res，1978，38：379-384)。羧甲基可德兰也许不是直 接作用于肿瘤细胞，文献(Ohya Y，et al：Carbohydr Polym，1994，23：47-54)报道了胞壁酰 二肽类似物(GADP)羧甲基可德兰偶联物的免疫增强活性，表明这种免疫增强活性不仅 仅是使GADP具有了聚合物的特征，而且是因为GADP和具有免疫活性的多糖——可德兰的 杂化引起的。

目前，对可德兰衍生物进行修饰的研究比较少，主要有磺酰脲修饰的羧甲基可德兰 (Na K，et al：J Control Release，2000，69：225-236)；脱氧胆酸修饰的羧甲基可德兰(Gao F P， et al：Carbohydr Poly，2008，71：606-613)等等。胆固醇具有良好的生物相容性，有潜在的与 细胞表面的胆固醇受体结合的作用(Yeagle PL，Biochimie，1991，73：1303-1310)，且有很 强的促进胆固醇偶合物自聚集的作用(Yusa S，et al：Langmuir，1998，14：6059-6067)。但是， 迄今为止，胆固醇与羧甲基可德兰多糖偶合物，通过透析加探头超声法制备纳米粒子作为 抗肿瘤药物载体的研究尚未见任何文献或专利报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种胆固醇基-羧甲基可德兰多糖纳米粒子及制备方法。本发明 是一种新型，价廉易得，可大规模生产的纳米载体，并可提高纳米载体的靶向性，降低抗 肿瘤药物的毒副作用，克服现有药物载体的一些不足。

本发明提供的一种胆固醇基-羧甲基可德兰多糖纳米粒子，它是以胆固醇、羧甲基可 德兰多糖为原料，羧甲基可德兰的羧基经1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)首先活化再与胆固醇反应合成，摩尔配比：羧 甲基可德兰多糖∶胆固醇∶EDC∶NHS＝1∶0.2～0.5∶1∶0.5，具体步骤：