[发明专利]防治心脏疾病的方法和试剂

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域；更具体地，本发明涉及防治心脏疾病的方法和试剂。

背景技术

心脏病是心脏疾病的总称，包括风湿性心脏病、先天性心脏病、高血压性心脏病、冠心病、心肌疾病等各种心脏病。心脏病是目前危害人类健康的主要疾病之一。

心脏在受到各种生理刺激，组织损伤或者内分泌失调的情况下会产生肥厚性生长以维持心脏血输出量。心肌肥厚在功能上是一个初始的适应性反应，但是持续的心肌肥厚会导致心衰和猝死。心肌肥厚是一个复杂的病理过程，伴随着心肌细胞蛋白含量增加，胎儿期基因重新表达，心肌细胞骨架重排。微丝骨架在心肌病的发病过程中发挥了重要的功能，不仅参与维持细胞形态完整性和机械阻力，而且参与了胞外信号向胞内的传导以调节心肌基因的表达和功能。

微丝骨架的动态变化受到多种微丝结合蛋白的调控。Twinfilin是一个在进化上很保守的微丝结合蛋白，在从酵母到哺乳动物的有机体中参与细胞骨架结构及其动态变化。Twinfilin与微丝单体高亲和力结合，抑制其结合到微丝增长端。它也可以与另一个保守的骨架调控子帽子蛋白结合于微丝末端。在细胞内，twinfilin呈现胞浆弥散定位，并且聚集于微丝骨架动态区。在出芽酵母中敲除twinfilin导致皮质微丝斑增多以及双极出芽方式异常。果蝇twinfilin基因突变导致依赖于微丝骨架的发育过程缺陷。哺乳动物中有两个twinfilin基因。Twinfilin-1(TWF-1)主要表达于非肌肉细胞；而twinfilin-2(TWF-2)主要表达于骨骼肌和心肌。在小鼠非肌细胞系中，过表达TWF-1引起应力纤维减少和蠕虫状异常纤维的出现。在培养的大鼠原代心肌细胞中，TWF-1呈点状胞浆定位，并沿肌纤维分布。然而，TWF-1在心肌疾病中的调控和功能尚不清楚。

最近，一种新的基因调控子，microRNA(miRNA)被报道在心肌肥厚中发挥重要功能。MiRNA是一类长18～22碱基的保守的单链非编码RNA。它们通过剪接mRNA或者抑制mRNA翻译参与基因表达负调控。Dicer是miRNA成熟过程中的一个关键RNase III内切酶。在新生小鼠心肌中特异敲除Dicer导致猝死和轻微的心肌重构，在成年小鼠心肌中敲除则导致心肌功能失调及肥厚相关基因的表达。最近研究表明一些miRNA，包括miR-133，miR-208，miR-195，和miR-1主动参与心肌细胞肥厚。其中，miR-1是一个肌组织特异的miRNA，在心脏的发育和分化过程中发挥重要功能。MiR-1也可通过调控心肌生长，电传导，钙离子依赖的信号通路参与心肌肥厚。然而，在心肌肥厚过程中miRNA是否参与心肌细胞骨架调控仍未证实。

因此，本领域还有必要研究心肌肥厚等心肌疾病的发生发展机制，进一步找到心肌疾病相关的药物靶点，从而为这类疾病的预防或治疗提供行之有效的途径。

发明内容

本发明的目的在于提供防治心脏疾病的方法和试剂。

在本发明的第一方面，提供一种TWF-1抑制剂的用途，用于制备预防或治疗心脏疾病的组合物。

在一个优选例中，所述的TWF-1抑制剂选自：特异性干扰twf-1基因表达的小干扰RNA分子或反义核苷酸；或特异性与TWF-1结合的抗体或配体。

在另一优选例中，所述的TWF-1抑制剂是miR-1。

在另一优选例中，所述的TWF-1抑制剂是特异性干扰twf-1基因表达的小干扰RNA分子，其序列如SEQ ID NO：15所示。

在另一优选例中，所述的组合物用于降低骨骼肌α-肌动蛋白基因(acta1)，β-肌球蛋白重链基因(myh7)或心房钠尿肽基因(nppa)的表达。

在另一优选例中，所述的组合物用于减小心肌细胞的大小。

在另一优选例中，所述的心脏疾病是心肌疾病。

在另一优选例中，所述的心脏疾病选自：心肌肥厚或心衰。

在本发明的另一方面，提供一种TWF-1的抑制剂，其是一种小干扰RNA分子，序列如SEQ ID NO：15所示。

在本发明的另一方面，提供一种miR-1的用途，用于制备抑制twf-1基因表达的组合物。

在一个优选例中，所述的miR-1的序列如下式所示：

N₁UGN₂AAUGUAAAGAAGUAUGUN₃N₄N₅N₆；