[发明专利]一种去氧穿心莲内酯分离纯化方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种中药有效成分分离纯化方法，确切地说是一种去氧穿心莲内酯分离纯化 方法。

二、背景技术

穿心莲[Andrographis paniculate(Burm.f.)Nees]为爵床科植物穿心莲的全草或叶。别名： 春莲秋柳(《岭南采药录》)、一见喜(《泉州本草》)、榄核莲、苦胆草、斩蛇剑、日行千里、 印度草(广东)，苦草(福建)等。原产于印度，我国主产于华南、西南等长江以南温暖、湿润 地区、其气味苦、性寒、归大肠、心、肺、膀胱经，具有清热解毒、凉血、消肿的功效。用 于感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮，顿咳劳嗽，泄泻痢疾，热淋涩痛，痈肿疮疡，毒蛇咬伤。

穿心莲内酯类化合物主要活性成分有穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、 新穿心莲内酯等。

其中，去氧穿心莲内酯(dexyandrographolide)，别名：穿心莲甲素，脱羟基穿心莲内酯、 14-去氧穿心莲内酯，为萜类化合物；可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶和氯仿，微溶于苯和 乙醚；这无色针状结晶(乙醚-轻石油醚)，无色片状结晶(丙酮、乙醇或氯仿)；熔点：174～ 175.5℃；分子式：C₂₀H₃₀O₄；分子量334.44。有以下结构式：

去氧穿心莲内酯具有抗菌和钩端螺旋体作用。临床试用治疗钩端螺旋体、急性细菌性痢 疾、上呼吸道感染、流行性感冒及原因不明的发热等病症均有一定疗效。毒性小，未见明显 副作用。能减少二甲苯或H⁺刺激所致伊文思兰自毛血管壁的渗出，有抑制巴豆油所致大鼠 炎性渗出作用，对大鼠蛋清性足肿显著抑制作用，对肾上腺皮质功能有不同程度的兴奋作用。

鉴于去氧穿心莲内酯有上述专属功效，有必要进行分离纯化。而国内对穿心莲内酯类化 合物提取分离研究比较早，也比较多。早期主要以水浸提、乙醇提取、碱水提取为主，得到 的产品为粗提物(穿心莲总内酯含量在30％左右)。目前也有采用新技术提取分离穿心莲内 酯，取得了一定的成效，如南开大学采用大孔吸附树脂提取穿心莲总内酯的研究(范去鸽， 张秀莉，史作清，等.《离子交换与吸附》，2002，18(1)：30-35)；也有采用超临界流体技 术提取穿心莲总内酯(葛发欢，林秀仙，黄晓芬，等.《中药材》，2002，25(2)：101-102)， 产品质量相对传统工艺有所提高，但在提高产品纯度上没有明显优势，只是以穿心莲内酯总 内酯为考察指标的粗提物；也有采用超临界流体萃取技术提取分离穿心莲内酯专利报道，如 专利：一种提取穿心莲有效成份的方法(专利号：ZL00114213.5)。国内外对去氧穿心莲内酯 单体提取分离研究的报道较少。

2000药典则收集了穿心莲药材及片剂的质量检测方法，其内酯含量是重要的质控指标， 已得到多数研究的肯定，且大多数是以穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯为研究对象，而去氧穿 心莲内酯由于难与脱水穿心莲内酯分离，故研究较少，并被忽视利用。

目前制备高纯度萜类化合物在都采用有机溶剂反复重结晶方法，其耗时长、得率低，且 纯度也难于达到98％以上。

三、发明内容

本发明旨在为开发I类中药新药提供高纯度的原料药去氧穿心莲内酯，所要解决的技术 问题是去氧穿心莲内酯的分离和纯化。

本发明的技术方案是以穿心莲浸膏(穿心莲总内酯含量≥30％)为起始原料，浸膏先经过 氯仿进行萃取，脱溶后得到浅黄色的粗晶体，然后上色谱柱，接收含量70％以上的去氧穿 心莲内酯单体组分，脱溶后再用有机溶剂重结晶，最后进行超临界流体抗溶剂结晶。

所谓的超临界流体抗溶剂结晶，就是以超临界流体为逆溶剂，其与溶质、溶剂形成的溶 液相混合，快速带走溶剂和部分杂质使溶液在较短的时间内形成较高的过饱和度，溶质结晶 析出，得到纯度高，粒径分布均匀的微粒。一般选CO₂为超临界流体。

具体的技术方案是：

将穿心莲浸膏溶于温水中，用氯仿萃取，萃取液脱溶后上色谱层析柱，并用混合溶剂洗 脱，接收含量70％以上的去氧穿心莲内酯组分，脱溶后再采用乙酸乙酯进行重结晶，纯度 达97％，最后进行超临界CO₂抗溶剂结晶，通过控制压力、温度、时间进行结晶，经1次抗 溶剂结晶后，可制得99％上的去氧穿心莲内酯高纯品。

具体操作步骤是：