[发明专利]防除连作烟草青枯病的拮抗菌及用其微生物有机肥料

权利要求书

1.用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌，该菌株NJL-25属于短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)，2009年7月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3175，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性G⁺，细胞形状为杆状，在膨大孢囊内含椭圆形芽孢，菌落平滑，严格好氧生长，接触酶阴性、V.P.反应阴性，甲基红试验阴性，发酵蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇等产酸不产气，硝酸还原酶阴性，淀粉水解阴性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，不产生硫化氢，产生吲哚，最适生长温度30℃，最适pH为7.0。

2.用权利要求1所述用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌所生产的微生物有机肥料，该肥料还含有拮抗菌NJL-14，菌株NJL-14属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，2009年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3174。

3.根据权利要求2所述的防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料，其特征在于：该肥料中含有1×10¹⁰个/g以上的拮抗菌NJL-25和NJL-14、全氮质量比含量为4～5％，全氮中质量比90％以上为有机氮，总氮磷钾养分质量比为6～10％、有机质质量比含量为30～35％。

4.权利要求2或3所述防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料的生产方法，包括：

1)将权利要求1所述的菌株NJL-25和菌株NJL-14分别接种到PDA培养液，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为7.0-7.2，培养温度30℃，溶氧：通气量范围为30～100％，170转/分钟，发酵中后期形成芽孢，发酵的拮抗菌液含菌或芽孢量≥1×10¹⁰个/ml；

2)将NJL-25和NJL-14液体菌剂按50L/吨的量分别接种到腐熟的猪粪堆肥和菜粕微生物酶解混合物中进行固体发酵，发酵温度为30-50℃，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7天后结束，使拮抗菌含量达到1×10⁸个/g以上，分别获得拮抗菌NJL-25和NJL-14的固体菌剂；

3)按猪粪堆肥和菜粕的微生物分解混合物两类分别将拮抗菌NJL-25固体菌剂和NJL-14固体菌剂以体积比1∶1混合，获得猪粪堆肥的固体混合菌剂和菜粕微生物分解混合物的固体混合菌剂；

4)再将猪粪堆肥的固体混合菌剂按体积比50-70％与菜粕微生物酶解混合物的固体混合菌剂按体积比30-50％的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟过程中翻堆2次，最后在温度不超过60℃的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至30％以下，包装出厂即为防除连作烟草青枯病的微生物有机肥料。

5.根据权利要求4所述微生物有机肥料的生产方法，其中步骤(1)所用PDA培养液配制方法为：

用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30min，经过滤后滤液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值调至7.2-7.4，121℃灭菌20min。

6.根据权利要求4或5所述微生物有机肥料的生产方法，其中步骤(2)所用腐熟后的猪粪堆肥发芽指数为98％以上，有机质质量比含量≥35％，有机氮质量比含量为1.2-2％，含水量质量比25-30％。

7.权利要求2所述微生物有机肥料在防除连作烟草青枯病方面的应用。