[发明专利]人纤溶酶原Kringle5多克隆抗体及其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其是涉及一种人纤溶酶原Kringle5多克隆抗体及其制备方法及 应用。

背景技术

新生血管异常增生所引起的全身组织及器官的损害是目前最为棘手的医学难题之一，是 全身许多重大疾病的病因和/或重要病理特征。人纤溶酶原Kringle5(Human Plasminogen Kringle 5，K5)是引人注目的抑制血管生成蛋白之一，是目前发现抑制新生血管活性最强的 纤溶酶原片段，具有生物活性强、细胞特异性高、分子量小、副作用小、性质比较稳定等诸 多显著优点(1、Cao.Y，Chen.A.An，S.S.Ji，R.W，Davidson.D and Llinas.M.Kringle 5 of plasminogen is a novel inhibitor of endothelial cell growth.J Biol Chem，272(36)：22924-22928， 1997；2、W.R.Ji，L.G.Barrientos，M.Llinás，H.Gray，X.Villarreal，M.E.DeFord，F.J.Castellino，R.A. Kramer and P.A.Trail.Selective inhibition by kringle 5 of human plasminogen on endothelial cell migration，an important process in angiogenesis.Biochem Biophys Res Commun，247(2)：414-419， 1998；3、Soff，G.A.Angiostatin and angiostatin-related proteins.Cancer Metastasis Rev，19(1-2)： 97-107，2000)。已证实了K5在新生血管性疾病如实体瘤(4、Davidson DJ，Haskell C，Majest S， et al.Kringle 5of human plasminogen induces apoptosis of endothelial and tumor cells through surface-expressed glucose-regulated protein 78.Cancer Res，65：4663-4672，2005；5、Perri SR， Nalbantoglu J，Annabi B，et al.Plasminogen kringle 5-engineered glioma cells block migration of tumor-associated macrophages and suppress tumor vascularization and progression.Cancer Res，65：8359-8365，2005)、糖尿病性视网膜增生(Zhihong Zhang，Jian-xing Ma，Guoquan Gao， Chaoyang Li，Lihui Luo，Mei Zhang，Wenzhao Yang，Aihua Jiang，Wenhui Kuang，Liying Xu，Jiaqi Chen，and Zuguo Liu.Plasminogen Kringle 5Inhibits Alkali-Burn-Induced Corneal Neovascularization.Invest Ophthalmol Vis Sci.46：4062-4071，2005)等疾病治疗中具有潜在的应 用前景。但目前尚缺乏有效、特异的人源性K5检测抗体，严重制约着K5作用机制的进一步 深入探讨及其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人纤溶酶原Kringle5多克隆抗体及其制备方法及应用。

本发明所述人纤溶酶原Kringle5多克隆抗体为兔的血清免疫球蛋白Ig G，由重链55kDa 和轻链30kDa两条链组成。它可以特异性识别并结合K5蛋白，可以有效应用于检测K5蛋白 的多种方法，如酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白免疫印迹(Western Blot)、免疫组织化学、免 疫荧光等检测。

本发明所述人纤溶酶原Kringle5多克隆抗体的制备方法包括以下步骤：

1)表达和纯化K5多肽：

2)制备人纤溶酶原Kringle5蛋白的多克隆抗体。