[发明专利]一种改良的双抗原夹心免疫检测法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体地说，是涉及一种改良的双抗原夹心 免疫检测法。

背景技术

免疫检测是应用免疫学技术测定标本中待测物质的方法。在临床检验 中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。根据检测原理 的不同，免疫检测可以分为间接法、夹心法(包括双抗原夹心法和双抗体 夹心法)、捕获法、竞争法等。

双抗原夹心法属于夹心法的一种，广泛应用于免疫检测领域。其基本 原理是：用特异性抗原进行包被和制备标记结合物，通过两次免疫结合， 形成包被抗原-抗体-标记抗原复合物，完成待测抗体的检测。根据抗原标 记物及检测技术的不同，双抗原夹心法又可进一步具体应用于酶联免疫 (ELISA)、快速诊断(包括基于胶体金、胶体银、胶体硒、乳胶等的快速 诊断)、放射免疫、荧光免疫等检测中。

酶联免疫的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合 在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体 既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。双抗原夹心ELISA法，是双抗原 夹心免疫检测法在ELISA检测上面的一个具体应用。在测定时，受检标本 中的抗体与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方式使固相载体 上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原， 也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检抗体的 量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产 物的量与标本中受检抗体的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或 定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测 定方法达到很高的敏感度。故双抗原夹心ELISA法广泛应用于传染病等项 目的抗体检测，具有灵敏度高，特异性好的特点。

快速诊断检测采用胶体金、胶体银、胶体硒、乳胶等标记物，利用此 类标记物可以牢固吸附在抗原/抗体的表面而不影响抗原/抗体的活性，当 标记抗体/抗原与待测标本中的抗原/抗体反应聚集到一定浓度时，可以直 接呈现颜色，从而达到快速诊断的效果。快速诊断检测又可进一步具体为 斑点渗滤法，免疫层析法等。免疫层析法是上世纪九十年代兴起的一种基 于免疫胶体金技术的快速诊断技术，其原理是将特异的抗体/抗原先固定于 硝酸纤维膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品后，由于 毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体/抗原的区域 时，样品中相应的抗原/抗体即与该抗体/抗原发生特异性结合，若用免疫 胶体金可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。双抗原 夹心免疫层析法，是双抗原夹心免疫检测法在免疫层析检测上面的一个具 体应用，此方法检测待测样品中的目标抗体，具有迅速便捷的优势。

化学发光免疫测定(Chemiluminescent immunoassay，CLIA)是将抗 原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检 测技术。放射免疫测定法将放射性的灵敏度与免疫的特异度相结合，既简 便准确又灵敏可靠。双抗原夹心法均可具体应用于这两种检测方法。

但是，双抗原夹心法在具体实施时，常常会由于试剂、材料、环境等 因素，特别是待测样品中的一些干扰性物质会引起非特异性结合，导致有 一定程度的假阳性，影响了检测结果的可信度。常规的处理方法就是调低 包被或者标记抗原的用量，提高抗原纯度，严格控制双抗原夹心法试剂盒 材料的质量等方面去缓解。但是调低包被或者标记抗原的用量势必会降低 检测的灵敏度，提高抗原纯度也不可能使抗原纯度达到百分之百，试剂盒 材料的质量也不是自己可以随意可调控的因素。因此双抗原夹心法检测目 的抗体时，背景过高以及假阳率高始终是一个难以解决的问题。

为此，必须寻求一种方法来降低双抗原夹心法的背景和假阳率，提高 检测的特异性。

发明内容

发明目的：

本发明的目的就是为了提供一种改良的双抗原夹心免疫检测法，降低 检测的背景和假阳率，提高检测的特异性。

技术方案：

在双抗原夹心法检测样品时，有多种因素可能导致假阳，包括操作员， 待测样品本身含有的干扰性物质，试剂盒所采用的抗原抗体以及其它辅料 等等因素。在这些因素当中，检测中由于样品含有的干扰性物质的非特异 性结合是引起假阳的重要因素。