[发明专利]一株高产竹红菌素的竹黄无性型菌株及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物，具体而言，涉及竹红菌素，还涉及其筛选方法。

背景技术

竹红菌素是一类苝醌类光敏色素物质，其具有抗炎、镇痛、抗菌、光 敏杀伤肿瘤细胞、减轻毒副作用以及抑制肉芽组织增生等作用。此外，在 食品添加剂和新型生物农药上，竹红菌素具有广阔的应用前景。目前，在 自然界中只发现了Hypcrella bambusae(Berk.et Br.)Sacc.， Hypomyces(Fr.)Tul.sp.，Shiraia(Henn.)sp.，这几个产竹红菌素的 真菌，资源有限。目前，检测竹红菌素产量的传统方法是采用有机溶剂提 取紫外分光光度仪下进行的，因为色素的产量不一定就是竹红菌素的含量， 所以筛选存在一定的不准确性。经过检索，尚无竹红菌素筛选技术的专利 申请，也没有相关的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一株高产竹红菌素的竹黄无性型菌株，使其可用 于竹红菌素的制备及微生物发酵工程；本发明的又一目的是提供一种简单、 准确的筛选高产竹红菌素的方法。

发明人通过反复的探索试验认识到，为摆脱传统上单纯依靠有机溶剂 提取紫外分光光度仪下检测的方法，需要开拓既定性又定量、简单又容易 操作、对设备要求不高的新方法，以便于对高产竹红菌素的菌种进行筛选。 通过此方法，发明人对竹黄(Shiraia bambusicola P.Henn.)的无性型 菌株经行了筛选，并且获得了一株高产竹红菌素的菌株。

本发明提供的高产竹红菌素的菌株是竹黄的无性型菌株，该菌株是从采 自浙江省桐庐县的竹黄子实体上分离获得；该菌株为竹黄GZUIFR-08K1，保 藏中心的菌株保藏编号：CCTCC NO：M209141，拉丁文名称为Shiraia  bambusicola GZUIFR-08K1，2009年7月7日在中国典型培养物保藏中心保 藏，其地址为中国.武汉.武汉大学。

上述竹黄的无性型菌株在查氏培养基上，26℃培养4d后，菌落直径 超过2.5cm，10d后菌落直径达6～7cm，菌丝有隔，有分枝，透明，宽 度3～8μm；菌落表面初期呈棉絮或疏松绒毛状，有同心轮带，白色后呈 淡褐色，基质菌丝密致呈黑色；培养10d后，未见产孢结构。

本发明提供的筛选方法是将滤纸片浸于竹红菌素的乙醇萃取液中1h 后，置于暗处适度挥干溶剂后，将6个纸片叠起铺在涂布有100μL金黄色葡 萄球菌的普通肉汤培养基(0.5cm厚)上，光照60min后，在此条件下，竹 红菌素的抗菌活性最高。

上述竹红菌素的筛选方法包括：(1)供试菌的选择；(2)竹红菌素激 发条件的选取；(3)供试菌培养条件的确定；(4)筛选方法的具体过程； (5)性能检测。

本发明的竹黄无性型菌株的应用方法是将竹黄无性型菌株接种于PDA 液体培养基上，26℃下恒温培养14d，收集菌丝体，烘干，用乙醇提取得 到竹红菌素；再应用上述的筛选方法，根据抑菌圈的大小来判断不同菌株 所产竹红菌素含量的高低；此筛选方法可以为需要竹红菌素的相关发酵工 业、生物医药、食品添加剂和新型生物农药等选育菌种。

发明人指出：为发挥真菌资源的综合效益，探索一种筛选高产竹红菌 素的方法及其应用是一项有意义的研究工作。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：与传统方法相比， 既能定性又可以定量，简单又容易操作，是一种对设备要求不高的新方法， 便于对高产竹红菌素的菌种进行筛选。

附图说明

图1为竹红菌素的光敏活性抑制细菌的效果图，图2为光照时间对抑 菌效果的影响，图3为供试细菌培养时间对抑菌效果的影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述。

实施例1研究光照时间和供试细菌培养时间对竹红菌素光敏抑菌活 性的影响

1.实验材料与方法

1.1材料来源

革兰阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草杆菌 (Bacillus subtilis)，均为贵州大学真菌资源研究所保藏。

普通肉汤液体培养基：牛肉250g切块，加水约500ml，煮沸30min，过 滤，加蛋白胨10g，葡萄糖1g，水补足1000mL，pH7.4。灭菌条件：121℃， 25min。