[发明专利]定量检测人血清中自体α-突触核蛋白抗体的方法

权利要求书

1.一种定量检测人血清中自体α-突触核蛋白抗体的试剂盒，其特征在于，所 述试剂盒包括：人α-突触核蛋白和抗人α-突触核蛋白抗体，

以及如下辅助试剂，

抗原稀释液：0.05M碳酸缓冲液，

抗体与血清稀释液：10％BSA/PBS，

洗板液：0.1％(v/v)Tween-20/PBS，

封闭液：10％BSA/PBS，

标记二抗：AP-山羊抗兔IgG；AP-山羊抗人IgG，

显色底物：p-Nitrophenyl Phosphate Liquid Substrate System96孔ELISA板。

2.权利要求1的试剂盒，其中人α-突触核蛋白的制备如下： pGEX-hα-SYN重组质粒常规转化BL21感受态细胞，取1菌落植入10ml 2×YTA-amp液体培养基37℃振荡过夜，预培养后转移至1升新鲜的2×YTA-amp 培养基中，37℃振荡培养3h后加IPTG诱导蛋白表达，继续培养4h后收获细 菌，以冰冷PBS悬浮细菌，超声破碎细菌后离心，上清经谷胱甘肽-Sepharose 亲和层析纯化得到GST-hα-SYN融合蛋白，再经凝血酶分解、酶切过柱纯化得到 重组人α-突触核蛋白，

其中，所述2×YTA-amp液体培养基每升含16g蛋白胨、10g酵母提取物、5g NaCl 和0.1g氨苄青霉素。

3.权利要求1的试剂盒，其中抗人α-突触核蛋白抗体的制备如下： 家兔4只，免疫前采血，制备血清备用；2mlα-突触核蛋白溶液与等量的经充分 震荡的福氏完全佐剂充分乳化；每只动物接受0.8ml乳化后的抗原溶液皮下注 射，初次免疫14天后，采血制备抗血清，检测免疫效果；初次免疫4周后，动 物接受强化免疫，2周后，采血制备抗血清；采取硫酸铵盐析法分离纯化抗体。