[发明专利]一种食品中非法添加工业染料-酸性橙Ⅱ含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食品中非法添加工业染料-酸性橙II含量的测定方法，特别是涉及一种运用串联液相质谱仪测定食品中非法添加工业染料-酸性橙II的含量的方法

背景技术

酸性橙II是一种偶氮类酸性工业染料，又名酸性金黄II、金橙II或酸性艳橙GR，俗名金黄粉，。溶于水、乙醇。主要用于蚕丝、羊毛的染色。也可染皮革、纸张、锦纶。能印花。还可用作指示剂。拔染性、匀染性好，染色牢度较差，适用于色泽鲜艳度高的绒线染色。染色时遇铜离子趋向红暗，遇铁离子色泽浅暗。

非食用色素酸性橙II又名金橙II、二号橙、桔黄橙、酸性金黄II或酸性艳橙GR，俗名金黄粉，化学名为2-萘酚偶氮对苯磺酸钠，是酸碱指示剂。医学上用于组织切片染色，在纺织上用作着色剂、皮革制品、塑料及木制品的染色。酸性橙II为中等毒性致癌合物，禁止在食品中使用。

酸性橙II属非食用色素，食品中不允许加入。但是由于酸性橙II色泽鲜艳、着色稳定、价廉等特点，一些不法商贩为了牟取暴利将其用于食品生产与加工，严重危害了消费者身体健康。因此，及时准确判断食品中是否存在该非食用色素，建立一套快速、准确的食品中非食用色素酸性橙II的测定方法具有重要意义。

发明内容

本发明提供的是一种食品中非法添加工业染料-酸性橙II含量的测定方法。

1原理

试样中的目标化合物用甲醇-乙酸铵溶液提取，经弱阴离子交换固相萃取柱净化后，液相色谱-串联质谱测定，基质加标工作曲线外标法定量。

2试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

2.1甲醇：液相色谱纯

2.2乙酸铵

2.3甲酸

2.4氨水

2.5提取溶液：称取3.9克乙酸铵用水溶解，加入10.0mL甲酸，用水定容到500mL后，用甲醇定容到1000mL。

2.6固相萃取柱平衡溶液：称取3.9克乙酸铵用水溶解，加10.0mL甲酸，用水定容到500mL。

2.7淋洗溶液：称取3.9克乙酸铵用水溶解，加10.0mL甲酸和25.0mL甲醇，用水定容到500mL。

2.8洗脱溶液：取5mL氨水用甲醇定容至100mL。

2.9样品稀释液：称取0.39克乙酸铵用水溶解，加0.50mL甲酸，用水定容到250mL后，用水定容到500mL。

2.10流动相A：称取0.39克乙酸铵用水溶解，加0.50mL甲酸，用水定容到500mL。

2.11流动相B：乙腈，液相色谱纯。

2.12弱阴离子交换固相萃取柱：WAX，60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL水以及3mL固相萃取柱平衡溶液(2.5)活化。

2.13标准品：酸性橙II。

2.14标准储备液(1.0mg/mL)：准确称取0.0100克酸性橙II标准品，用50％甲醇水溶液定容至10.0mL。

2.15标准系列：配制酸性橙II标准系列，酸性橙II浓度为：25、50、100、200、400ng/mL。

3仪器和设备

3.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾(ESI)离子源。

3.2离心机。

3.3超声波水浴。

3.4固相萃取装置。

3.5氮吹仪。

4样品及基质加标工作曲线的制备

4.1样品的制备

a)提取

称取1.0克试样于50mL离心管中，加入10.0mL提取溶液，超声提取30分钟，10000r/min离心10分钟，上清液转移至另一50mL离心管中；残渣中加入10.0mL提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。

b)净化

取5.0mL样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液(2.5)稀释定容至50.0mL，过已活化好的弱阴离子固相萃取柱，用2mL淋洗液、2mL水淋洗，5mL洗脱液洗脱，收集洗脱液，用氮气吹至近干，用样品稀释液定容至1.0mL，过0.22μm滤膜后液相色谱-串联质谱测定。

4.2基质加标工作曲线的制备

称取1.0克空白样品基质于50mL离心管中，称取6份，分别加入标准系列溶液(2.15)100μL，按4.1进行操作，制备基质加标工作曲线，酸性橙II为：25、50、100、200、400ng/mL。。

5测定

5.1液相色谱-串联质谱参考条件

色谱柱：BHT 1.7μm×100mm

流动相：0.1％甲酸的5mmol/L乙酸铵水溶+乙腈9(1+9)。

进样量：5μL。