[发明专利]检测猪免疫球蛋白G的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测猪免疫球蛋白G的 酶联免疫试剂盒，其特别适于猪血浆蛋白粉中猪免疫球蛋白G的测定。

技术背景

血浆蛋白粉作为一种新型蛋白饲料，具有营养全面、易消化吸收、适口性 好、富含免疫球蛋白等特点，在仔猪饲料中广泛添加。按照其血液原料来源和 加工方法主要有以下几类：猪血浆蛋白粉(spray-dried plasma protein，SDPP)、低 灰分猪血浆蛋白粉(LAPP)、母猪血浆蛋白粉(SDSPP)和牛血浆蛋白粉(SDBP)，作 用效果大体相同，其中以SDPP较多且最为常用，因此一般情况下血浆蛋白粉多 指SDPP。

大量研究表明，SDPP对仔猪的免疫保健作用主要是由于其富含的大量免疫 球蛋白。早期断奶仔猪免疫系统尚未发育成熟，机体抵抗能力低，SDPP则可以 提高其抵抗能力，加强免疫保健。因此免疫球蛋白含量是判定血浆蛋白粉质量 和品质的重要指标。因此，一种能够检测SDPP中猪免疫球蛋白G含量的方法 显得特别重要。

目前主要采用琼脂双向或单向免疫扩散法，此外还有免疫电泳法、高压液 相色谱法等等来测定猪免疫球蛋白G含量。由于上述方法所用技术难以系统化 和标准化、仪器设备复杂和操作繁琐等因素，不适合现场查验和大量样本筛查。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种用于猪免疫球蛋白G含量测定的 酶联免疫试剂盒，其操作简单适合现场大批量样品的筛选。

本发明试剂盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶标板(包被原为抗原、抗体或抗抗体)；

(2)酶标记物(为酶标记抗原、酶标记抗体或酶标记抗抗体)；

(3)猪免疫球蛋白G特异性抗体工作液(当酶标板上包被抗原且酶标记物为 酶标记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标记抗原时含 有)；

(4)猪免疫球蛋白G标准品溶液；

(5)底物显色液；

(6)终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)浓缩复溶液。

本发明所提供的检测猪免疫球蛋白G的酶联免疫试剂盒，包括猪免疫球蛋白 G特异性抗体工作液及预包被包被原的酶标板和酶标记物工作液；所述酶标记 物为酶标记的抗抗体，酶标记猪免疫球蛋白G抗原或酶标记猪免疫球蛋白G特 异性抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，其中优选辣根 过氧化物酶；酶标记的羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸 钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的；酶标记抗原是采用戊二醛法或过碘酸 钠法将标记酶与猪免疫球蛋白G偶联得到的；酶标记特异性抗体是采用戊二醛 法或过碘酸钠法将标记酶与特异性抗体偶联得到的，辣根过氧化物酶可采用现 有技术中的多种方法将其与抗抗体进行偶联，如戊二醛法，过碘酸钠法等，本 发明经过长期的劳动创造将过碘酸钠法进行了改良，使其省时、降低辣根过氧 化物酶(HRP)与抗抗体的浓度比率，节省了原材料。

所述猪免疫球蛋白G特异性抗体可为猪免疫球蛋白G单克隆抗体或猪免疫 球蛋白G多克隆抗体；它们均是用猪免疫球蛋白G作为免疫原得到的；所述猪 免疫球蛋白G多克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体，所述猪 免疫球蛋白G单克隆抗体优选为猪免疫球蛋白G鼠单克隆抗体，所述猪免疫球 蛋白G多克隆抗体优选为猪免疫球蛋白G兔多克隆抗体。

所述猪免疫球蛋白G单克隆抗体优选为猪免疫球蛋白G的单克隆杂交瘤细 胞株C-4-2CGMCC No.3110分泌的单克隆抗体。

所述猪免疫球蛋白G单克隆杂交瘤细胞株C-4-2CGMCC No.3110(分类命 名：对猪IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株)已于2009年05月26日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区 大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)。

以上抗体均可以用猪免疫球蛋白G作为免疫原制备。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括猪免疫球蛋白G 标准品溶液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。

所述浓缩洗涤液优选为0.5％～1.0％吐温20和0.1-0.3‰硫柳汞防腐剂、pH为 7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量百分比。