[发明专利]小鹅瘟、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种小鹅瘟、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

小鹅瘟(GD)是由鹅细小病毒(GPV)引起的一种急性和亚急性败血症，本病主要侵害出壳后3～20天的雏鹅，传播速度快，病死率高；鹅副粘病毒病(GPM)是由鹅副粘病毒(GPMV)引起的一种以呼吸道紊乱、腹泻为主要症状的病毒性传染病，对雏鹅危害甚大。

目前，小鹅瘟防疫主要用小鹅瘟弱毒疫苗进行雏鹅免疫，但由于7～10天才可以产生足够的保护性抗体，此空白期对于高度暴露的雏鹅来说相当危险，生产实践也证实免疫效果很差，因此急需一种免疫种鹅的强毒灭活疫苗以使雏鹅获得母源抗体保护。

鹅副粘病毒病国外尚无报道，国内研究也很少，无论灭活疫苗还是弱毒疫苗均为空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种小鹅瘟、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗及其制备方法。

本发明所提供的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗，包括小鹅瘟病毒病灭活疫苗和鹅副粘病毒病灭活疫苗，所述小鹅瘟病毒病灭活疫苗是将禽胚胎接种小鹅瘟病毒鸭胚化弱毒株得到的胚液灭活得到的；所述鹅副粘病毒病灭活疫苗是将禽胚胎接种鹅副粘病毒强毒株得到的胚液灭活得到的。

所述接种小鹅瘟病毒鸭胚化弱毒株的禽胚胎为鸭胚，接种鹅副粘病毒强毒株的禽胚胎为SPF鸡胚。

所述小鹅瘟病毒病灭活疫苗与所述鹅副粘病毒病灭活疫苗的体积份数比为4∶2.5～4∶3。

本发明提供一种小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗油乳剂，由终浓度为0.01克/毫升的硬脂酸铝和下述体积份数的组分组成：

小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活含毒胚液 96体积份；

吐温-80                                    4体积份；

注射用白油                                 94体积份；

司本-80                                    6体积份；

所述小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗为上述的疫苗。

本发明所提供的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗的制备方法，是将接种小鹅瘟病毒鸭胚化弱毒株的禽胚胎和接种鹅副粘病毒强毒株的鸡胚胎孵育，挑选在孵育96～216小时之间死亡的胚胎，收集胚液，在胚液中加入甲醛灭活得到小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗。

所述方法中，所述加入甲醛的终浓度为0.35％(体积百分比浓度)。

所述方法中，所述接种小鹅瘟病毒鸭胚化弱毒株的禽胚胎为鸭胚，接种鹅副粘病毒强毒株的禽胚胎为SPF鸡胚；所述从接种小鹅瘟病毒鸭胚化弱毒株的禽胚胎收集的胚液与所述从接种鹅副粘病毒强毒株的禽胚胎收集的胚液的体积份数比为4∶2.5～4∶3。

所述方法中，所述禽胚胎为8～10日龄，所述接种途径为尿囊腔接种，所述孵育的温度为37摄氏度。

本发明提供的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗油乳剂的制备方法，包括下述步骤：

1)油相制备：取注射用白油94体积份，加司本-80 6体积份，混合后，加硬脂酸铝至浓度为0.02克/毫升，混匀灭菌；

2)水相制备：取吐温-804体积份，灭菌，加入权利要求5-8所述的方法获得的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗96体积份，振摇使吐温-80完全溶解；

3)乳化：取步骤1)获得的油相1与步骤2)获得的水相搅拌混匀，得到小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗油乳剂。

上述制备的疫苗，免疫剂量可为0.25ml-2ml/只母鹅，优选0.5ml/只母鹅。

本发明的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗可以直接对种鹅进行免疫，预防雏鹅的小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病。田间安全试验证实，二联苗对种鹅是安全的，对产蛋率、雏鹅成活率影响甚微。该二联苗能使免疫鹅产生抵抗两种病毒的抗体效价水平，其孵化后代亦具有坚强抵抗两种病毒的抗体效价水平。免疫母鹅产蛋孵化后代的成活率为95％～98％(用户观察统计)，其2％～5％的未成活数大都系自然淘汰数和非特异死亡数。本发明小鹅瘟病毒病、鹅副粘病毒病二联灭活疫苗油乳剂制备工艺获得的油包水型油乳剂灭活苗乳化程序简单、粘稠度适宜[用1毫升吸管(下口内径1.2毫米，上口内径2.7毫米)，吸取25摄氏度左右的疫苗1毫升，令其垂直自然流出，流出0.4毫升所需时间为6秒]。

具体实施方式