[发明专利]表达促凋亡基因的靶向增殖的重组腺病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种表达促凋亡基因的靶向增殖的重组腺病毒及其应用，特别涉及含有该重组腺病毒的靶向抑制肿瘤细胞的生长和/或诱导肿瘤细胞凋亡的药物。 

背景技术

生物体的一切生命活动，从出生、成长、衰老到出现疾病直至死亡都与基因有关，基因调控着细胞的各种功能。人们已经认识到肿瘤是基因异常引起的，恶性肿瘤发病率、死亡率较高，已经成为危害人类生命的第一位杀手，这使得肿瘤基因治疗的研究成为近20年来基因治疗的热点。 

常用于肿瘤基因治疗临床试验的目的基因有抑癌基因、自杀基因、耐药基因、反义基因等。目前研究较多的是重组腺病毒p53，美国自1995年以来即开始了重组腺病毒p53制品的临床试验，并已完成了I、II期临床试验及部分III期临床试验。我国目前已有“今又生”上市(由正常人肿瘤抑制基因p53和改构的5型腺病毒基因重组而成)，获得了国家食品药品监督管理局颁发的新药证书、准字号生产批文、药品GMP证书，是世界首个获准上市的基因治疗药物。基因治疗不仅作为一个新的生物医学概念而为人们所接受，而且作为一种新的治疗手段和方法已被广大研究人员和临床工作者所实践。到目前为止所进行的不少研究表明，基因治疗实验是安全、有效和易于操作的。 

TFAR19(TF-1 cell apoptosis-related gene 19)是最近发现的一种新的凋亡调控基因，国际人类基因命名委员会将其命名为PDCD5(programmed cell death 5)，其编码的蛋白主要定位于细胞内，在人类50余种组织中广泛分布。目前，国内外已有多家实验室发现：PDCD5在疾病情况下，特别是在肿瘤如肝癌、乳腺癌及胃癌中的表达明显下降，PDCD5的低表达与胃癌的不良预后相关，而针对PDCD5的siRNA能减弱Bax过表达诱导的HeLa、HEK293和293T细胞凋亡，说明低表达PDCD5赋予这些细胞一定的抗凋亡能力。 

阮国瑞等从mRNA及蛋白水平证实了PDCD5在白血病病人骨髓细胞中低表达，在国际上率先发现急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)病人比慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)病人表达更低的PDCD5，CML病人尤其是加速/急变期的CML病人，PDCD5表达量与BCR-ABL表达量呈负相关。马曦等进一步的研究表明，CML病人PDCD5基因5’调节区2个SNPs位点影响启动子活性并与CML易 感性有关，拥有(_27G/_11A)这2个SNPs位点的启动子转录活性减低，并且不能被凋亡诱导因素所上调。利用酵母双杂交系统，发现PDCD5可结合多个重要的分子如HTATIP、EEF1G、KIAA1377、RIF1等，其中组蛋白乙酰转移酶HTATIP(histoneacetyltransferase Tat interactive protein 60kD，HTATIP，TIP60)不仅在染色质基因转录中发挥重要作用，具有ATP酶、DNA解旋酶及与DNA结合的活性，而且，在DNA双链断裂修复和凋亡中发挥重要功能，由于CML病人PDCD5表达降低，拥有5’调节区2个SNPs位点(_27G/_11A)的启动子转录活性减低，并且不能被凋亡诱导因素所上调，因而推测，CML病人低表达或异常表达的PDCD5与TIP60结合的能力可能受到影响，从而，可能进一步影响到TIP60发挥的染色质基因转录、DNA双链断裂修复和凋亡等等重要功能，BCR-ABL表达量增加的CML病人PDCD5表达量进一步降低，不仅使这些细胞抗凋亡能力增强，也可能增加了基因组内在不稳定性。说明低表达PDCD5可能在AML、CML病理机制或疾病进展中起一定作用。