[发明专利]基于免疫法的食品中兽药和饲料添加剂残留检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食品中兽药和饲料添加剂残留检测的精确定量方法，特别是涉及采用免疫法测量多种兽药和饲料添加剂混合残留的情况下，且测量用抗体与多种残留物间存在交叉反应时的各组分精确定量方法。

背景技术

现在食品安全中有害物质的残留是一项突出的问题，尤其是动物源性食品，如肉类、禽类、奶、蛋等等，其在人们日常膳食结构中所占比例越来越大。动物源性食品的安全问题主要包括兽药残留、饲料添加剂残留、工业废物的污染、病原微生物及寄生虫感染等。本发明针对基于免疫法的兽药和饲料添加剂残留的检测方法进行改进。

动物源性食品中常见的兽药和饲料添加剂来源有很多。一是滥用兽药，如磺胺类药物等等；二是恶意添加的化学物质，如盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、类固醇激素、苏丹红、三聚氰胺等等；三是治疗用抗生素残留，如青霉素、四环素、氯霉素等等。这些残留对人体健康造成很大的危害。随着食品安全法的实施，我国大大加强了监管和监测的力度。

现在针对这些兽药和饲料添加剂的检测方法有很多，国家标准也有相应的规定。例如抗生素的残留，采用微生物测定法；三聚氰胺的检测采用液相色谱法；瘦肉精采用色谱与质谱联用的方法等等。这些检测技术均比较复杂、耗时长，不适宜多样本的快速检测。因此，为了适应实际应用场合的需要，一些快速检测的新技术得到了发展。其中最具代表的就是基于免疫法的检测技术，其检测速度快、精度高。具体包括酶联免疫法、免疫层析法、免疫生物传感器等等。大量基于免疫法的产品也相应产生，主要是免疫试纸和免疫试剂盒。这些检测技术采用残留物与其抗体的特异性反应，能够快速、准确的检测出食品中的残留，检测限也远远满足国家标准的规定。酶联免疫法的发展最为迅速和广泛，针对各种有害残留物的检测试剂盒都在商品化出售。

以免疫法为基础的检测技术，均利用了被测物质与其相应抗体的特异性结合作用，其原理的不同只是在于，当两者的吸附作用发生时，各种方法引起的检测信号改变的不同。例如酶联免疫法，其原理是将抗体或抗原进行酶标记，通过检测酶与底物的显色反应，间接的反应抗体与被测物的结合情况；荧光免疫法是对抗体或抗原进行荧光色素标记，通过检测荧光物质的量，反映抗体与被测物结合的量；放射免疫技术是采用放射性核素对抗体或抗原进行标记，通过检测放射性核素的量间接检测抗体与被测物的结合；而基于表面等离子体共振的免疫传感器其原理是通过光学信号的变化反应被测物与抗体的结合。可以看出，诸多的免疫检测技术均是基于被测物与其抗体的特异性结合作用，需要用到抗体为耗材，因此这种检测技术势必受到抗体制备技术发展的限制。由于有些现有技术所制备抗体与多种抗原存在交叉反应，因此，免疫法存在无法精确测量多种混合残留物的弊病。

以磺胺类药物为例，具体包括：磺胺甲基异恶唑(SMZ)、磺胺异唑(SIZ)、磺胺喹恶啉(SQ)、磺胺脒(SG)、酞酰磺胺噻唑(PST)、琥珀酰磺胺噻唑(SST)等等。这些药物均是氨苯磺胺的衍生物，具有相似的化学结构式，因此，以其中某个药物作为抗原所制备出的抗体对该药物以外的其他磺胺类药物也有交叉反应，交叉反应率很高，10％-200％不等。因此，采用某种抗体进行检测时，无法区分具体的磺胺药物。抗生素的检测也是类似，在同族的抗生素中，各个抗生素具有相似的结构。例如β-内酰胺类抗生素，其化学结构式都含有一个β-内酰胺环，具体有青霉素G、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、头孢菌素、头孢氨苄等等；氨基糖苷类抗生素，其化学结构式均是以氨基环醇与氨基糖缩合而成的苷，具体有链霉素、卡那霉素、庆大霉素等等；大环内酯类抗生素均含一个大环内酯作为配糖体，以苷键和1～3个糖相连，具体有红霉素、白霉素等等；四环类抗生素以四并苯为母核，有四环素、土霉素等等。由于化学结构式的相似，同类抗生素的抗原决定簇往往也相同或相似，因此，同类抗生素的抗体也具有交叉反应。类似的还有其他添加剂，例如沙丁胺醇、克伦特罗、特布他林等，其均属于β-兴奋剂，具有相似的化学结构，其抗体往往对这些物质均有交叉反应，如有的公司制备的沙丁胺醇抗体对克伦特罗的交叉反应率达到13％。

因此，当被测食品中含有多种相似化学结构的残留物时，采用免疫法检测，某一种抗体可能与多种残留物均发生特异性结合，并且该抗体对不同的残留物的反应效率也不同，这些复杂的情况导致无法精确的测量出单个残留物的含量，总量测定也不准确。