[发明专利]中药贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于毛细管电泳电化学发光检测技术领域，具体涉及毛细管电泳电化学发光检测中药贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的方法。 

背景技术

由于中药中各种活性成分具有重要的药理作用，因此中药活性成分的检测已经成为当前分析化学研究的热点领域。为了提高中药产业的国际竞争力，中国的天然药物发展必须与先进的检测技术相接轨，中药的分析检测必须科学化。贝母是用于止咳化痰的一种有名的中草药。贝母中的两种主要活性成分贝母素甲和贝母素乙对止咳化痰具有重要的药理作用。人们一直在研究探索贝母中活性成分检测的新方法，对贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的有效分离、灵敏检测是化学分析领域的一个重要课题。 

由于贝母素甲和贝母素乙不具有生色基团，因此常需要对其进行衍生才可实现分析检测，目前对中药贝母中贝母素甲和贝母素乙的检测大部分集中在色谱-蒸发光联用法[1-3]，此外还包括高效液相色谱-质谱分析方法[4]。 

对贝母素甲和贝母素乙进行衍生往往需要繁复的操作程序，冗长的分析时间，且受蒸发光检测技术灵敏度的限制，很难满足中药贝母提取物中低含量活性成分的检测需求。高效液相色谱-质谱法不仅具有较高的灵敏度同时还能提供被分析物的结构信息，是中药提取物检测一个重要、常规的 分析方法。但是色谱-质谱需要的仪器设备昂贵、操作复杂，这是该技术难以推广使用的技术物质障碍。 

毛细管电泳是一种高效的分离分析手段，样品需求小，高效分离，仪器价格低廉，适用于各种带电离子以及中性物质的分析，在分析化学、生物分析化学等领域有着广泛的应用。吡啶钌电化学发光是一种灵敏的检测技术，其原理是通过电化学方法在电极表面产生一些特殊的物质，这些物质之间或与体系中其它组分之间通过电子传递形成激发态，激发态返回到基态产生发光现象，产生的发光强度正比于被分析物浓度，从而被分析物得到检测。吡啶钌电化学发光无需对待测样品进行衍生，无需其它额外的光源，避免了背景光源的干扰，且吡啶钌电化学发光反应高效可逆，试剂本身可循环使用，是一种灵敏经济的检测手段。毛细管电泳与吡啶钌电化学发光技术相联用，使二者的优势相得益彰，毛细管电泳电化学发光检测联用技术仪器造价低，操作简单，可实现待测样品的高效分离，灵敏检测。(参考文献[1]Z.Liu，Y.Jin，P.Shen，J.Wang，Y.Shen，Talanta 71(2007)1873.[2]Y.Jin，P.Shen，J.Zhang，C.Zhuo，C.Xu，Y.Yu，Research&Informationon Traditional Chinese Medicine 7(2005)13.[3]S.-L.Li，G.Lin，S.-W.Chan，P.Li，J.Chromatogr.A 909(2001)207.[4]J.-L.Zhou，P.Li，H.-J.Li，Y.Jiang，M.-T.Ren，Y.Liu，J.Chromatogr.A 1177(2008)126.) 

发明内容  本发明的目的是提供一种灵敏、简单、快速的毛细管电泳电化学发光检测贝母提取物中贝母素甲和贝母素乙的方法。 

1.1待检品的制备 

1.1.1中药贝母 

1.1.2贝母素甲标准溶液和贝母素乙标准溶液的制备 

分别把贝母素甲标准品和贝母素乙标准品溶解甲醇中，制得贝母素甲标准品储备液和贝母素乙标准品储备液，所述的储备液的浓度为分别为5.0mmol/L，储备液在4℃冰箱中冷藏保存； 

分别用甲醇，将贝母素甲标准品储备液和贝母素乙标准品储备液稀释成浓度为5.0×10^-4mol/L的贝母素甲标准溶液和贝母素乙标准溶液； 

1.1.3贝母提取物相关溶液的制备 

A.贝母提取物溶液的制备 

将贝母研磨成粉末，过40目筛子，称取0.2g中药贝母粉末，用0.2mL氨水碱化，然后在超声池中用3.0mL氯仿超声萃取30min，萃取操作重复2次，合并萃取液，在室温下挥发掉氯仿，得到中药贝母提取物干物质；由0.2g中药贝母粉末提取的干物质溶解在1.0mL甲醇中，用0.45μm的滤膜过滤，得到贝母提取物溶液； 

B.贝母提取物稀释溶液的制备 

由步骤A得到的贝母提取物溶液用甲醇稀释，获得贝母提取物稀释溶液，甲醇加入的体积是步骤A甲醇体积的20或120倍； 

C.贝母提取物稀释加标溶液的制备