[发明专利]一种糖化血红蛋白检测试剂盒及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明属于生物制剂技术领域，特别涉及一种糖化血红蛋白检测试剂盒及其应用。

(二)背景技术

现在糖尿病已成为继心脑血管疾病和肿瘤之后第三大非传染病，亦必然成为导致病残和死亡的重要原因之一，糖化血红蛋白可作为糖尿病患者长期血糖控制的指标，而且与糖尿病慢性并发症的发生及发展有密切关系。具体表现为①在糖尿病患者中，HbA1c水平能预测心血管疾病的危险；②在无糖尿病和HbA1c水平正常的人群中，HbA1c水平能预测死亡率；③具有较高浓度HbA1c的患者能从控制血压和降低胆固醇中获得裨益；④HbA1c可作为糖尿病或糖耐量受损(IGT)患者实用的筛查方法。

目前临床上检测糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，GHb)以HbA1c为代表，检测方法都是根据物理、化学或免疫学上的差异区分HbA1c和非HbA1c。而这些方法都是属于半定量性的，包括离子交换高压液相色谱分析法、阳离子交换树脂微柱层析法和电泳法的物理方法、基于化学原理的亲和色谱微柱法和基于免疫原理的免疫凝集抑制法。虽然有多种测定糖化血红蛋白的方法，但是到目前为止还没有一种方法能做到既准确、受干扰因素少，又经济、快速的检测。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种糖化血红蛋白检测试剂盒，利用其可以实现准确、经济、快速的对糖化血红蛋白的检测。

本发明采用的技术方案如下：

一种糖化血红蛋白检测试剂盒，包括封闭液、终止液、底物溶液，还含有下列试剂：

包被液：0.05mol/L pH8.5-9.6的碳酸盐缓冲液；

洗涤液：含0.05％(v/v)吐温-20的0.01mol/L pH7.4的PBS；

抗原稀释液：BSA溶于洗涤液的浓度为1g/L的溶液；

酶标抗原：辣根过氧化物酶标记的抗原；

抗体：鼠抗人。

所述包被液的pH为9.6。

所述试剂盒中还含有pH7.3浓度为0.05％(wt％)的NaN₃。此试剂可以保证试剂盒在较长时间内保存。

所述封闭液为含2％(g/ml)BSA的0.01mol/L pH7.4的PBS；所述的终止液为2mol/L的H₂SO₄。

所述底物溶液可选择由A液和B液组成的TMB底物液：

A液：

TMB             20mg

二甲基亚砜       4ml

C₆H₈O₇·H₂O    1.03g

双蒸水定容至100ml；

B液：

Na₂HPO₄·12H₂O    1.46g

C₆H₈O₇·H₂O      0.933g

30％过氧化氢      10μl

去离子水定容至100ml，pH值为5.0～5.4。

其他常规底物溶液也都可以使用，TMB(四甲基联苯胺)底物液使用时A液和B液等体积使用。

具体的，试剂盒中下列溶液的配方如下：

包被液：取Na₂CO₃ 1.59克和NaHCO₃ 2.93克溶于蒸馏水中，并最终加蒸馏水定容至1000ml，于4℃储存备用。

洗涤液：NaCl 8.0克、KCl 0.2克、Na₂HPO₄·12H₂O 2.9克、KH₂PO₄0.2克、吐温-20 0.5ml加蒸馏水至1000ml，4℃储存备用。

抗原稀释液：BSA 0.1克溶于100ml洗涤液。

封闭液：BSA 2.0克加PBS至100ml。

终止液：取双蒸水177.8ml，逐滴加入98％的浓硫酸22.2ml。

底物溶液：

A液：

TMB            20mg

二甲基亚砜      4ml

C₆H₈O₇·H₂O   1.03g

加双蒸水定容至100ml；

B液：