[发明专利]猪支原体肺炎与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1型基因工程株疫苗及应用

说明书

技术领域

本发明属于家畜传染病技术领域，与细菌基因工程技术领域有关。具体涉及一种重组猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型与猪支原体肺炎双价基因工程株的构建、疫苗制备及应用。

背景技术

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，简称App)旧称胸膜肺炎嗜血杆菌(Haemophiluspleuropneumoniae，HP)，能引起各年龄阶段的猪发生急慢性感染。胸膜肺炎放线杆菌，属于巴氏杆菌科(Pasteurellaceae)、放线杆菌属(Actinobacillus)，是一种革兰氏阴性小球杆菌，有荚膜和菌毛，不形成芽孢，能产生毒素，最近研究发现该菌还有鞭毛。根据APP生长对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide，NAD，又称V因子)的依赖性，把APP分为生物I型和生物II型两个生物型。生物I型菌株的生长依赖NAD，而生物I型菌株的生长不依赖NAD，但需要其它特定嘌呤或嘌呤前产物以辅助生长(Nielsen R，Andresen L O，Plambeck T，Nielsen J P，Krarup L T，JorsalS E.Serological characterization of Actinobacillus pleuropneumoniae biotype 2 strains isolatedfrom pigs in two Danish herds.Vet Microbiol，1997，54(1)：35-46)。

胸膜肺炎放线杆菌主要抗原是荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、溶血素、粘附素等抗原(王春来等，2001)。同时，APP的是一种多毒力因子病原，其毒力因子很多。现已发现与APP的致病性有关的毒力因子包括荚膜多糖(CP)、脂多糖(LPS)、外膜蛋白(OMP)、转铁结合蛋白(TBP)、溶血外毒素(Apx)、蛋白酶、渗透因子、黏附因子、菌毛、尿素酶以及细菌对转铁蛋白携带铁的利用能力等。

猪支原体肺炎(Macoplasmal pneumoniae of swine，MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp)引起的一种长期危害养猪业的慢性、接触性传染病，并广泛分布于世界各国(J.Vicca等，Evaluation of Virulence of Mycoplasma hyopneumoniae Field Isolation[J].VeterinaryMicrobilogy，97(2003)：177-190.A.D.Leman，Diseases of Swine，Eighth ed.Iowa State UniversityPress，Ames，Iowa，U.S.A.1999.)。同一猪群的发病率高达100％，特别是在高密度饲养的规模化猪场，一旦爆发该病就难以控制，造成严重的经济损失(Ross.R.F.Mycoplasmal disease，In.Straw，B.E.，Proceedingsof the Eighth Diseases of Swine[J].Iowa State University Press，Ames，IA，1999，p：495-510.TungdaHsu等，Molecular analysis of the P97 cilium adhesin operon of Mycoplasmahyopneumoniae[J].Gene，1998，214：13-23.)。无论是由Mhp和APP单独感染或混合感染均是引起目前呼吸道综合症的主要原因之一，给养猪业造成严重的危害(Kobisch，M.，1993.Pathologie pulmonaire duporcine modele experimental associant Mycoplasma hyopneumoniae and Actinobacilluspleuropneumoniae；Gottschalk，M.，Taylor，T.，2006.Actinobacillus pleuropneumoniae.In Straw，B.E.，Zimmerman，J.J.，D’Allaire，S.，Taylor，D.J.(Eds.)，Diseases of Swine)。