[发明专利]一种真菌硫氧还蛋白的多肽、编码序列及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，本发明涉及真菌杨树菇(Agrocybeaegerita)硫氧还蛋白基因序列。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽的制备方法，同时还涉及多肽在医药、抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

杨树菇(Agrocybe aegerita)隶属于真菌门、担子菌纲、伞菌目、粪锈伞科、田蘑属。又名柱状田头菇、杨树菇、茶薪菇、柳松茸等。富含人体必需的八种氨基酸，其中赖氨酸高达1.75％，其营养价值超过香菇、金针菇等其他食用菌，同时又具有独特的药用价值，民间常用于抗癌、降压，治疗胃冷、肾炎、水肿等有独特疗效，有″中华神菇″之美誉，但其中的药理成分并不明确，本发明中涉及的杨树菇硫氧还蛋白是我们首次发现的重要药理成分。

硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase，TrxR)是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员。其主要功能是催化NADPH将硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)上的-S₂还原成(-SH)₂的反应，即维持Trx的还原型，而Trx在氧化还原调节和抗氧化防御中有着重要作用。TrxR的底物专一性不强，除Trx外许多内生的和外来的化合物，如维生素K3、硫辛酸、DTNB和四氧嘧啶、磷脂氢过氧化物等，都可被TrxR还原。TrxR参与机体多种生物学活性，并与人类许多疾病有关，如肿瘤、获得性免疫缺陷综合征、自身免疫性疾病等。

TrxR在肿瘤细胞中表达量是正常组织的10倍。用免疫细胞化学法测定TrxR在人原发乳腺癌、甲状腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌及恶性黑色素瘤中的定位与表达，结果显示，侵袭力强的肿瘤过度表达TrxR，其增殖力强、凋亡率低、转移力高，因此，TrxR在癌及肿瘤的形成中有重要作用，可作为抗癌治疗的靶点。

本发明中提供一种真菌来源的硫氧还蛋白，具有抗肿瘤活性，可能作为TrxR的抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种多肽核苷酸序列，该序列能编码上述杨树菇硫氧还蛋白多肽序列。该序列与SEQ ID NO.1中1-327位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严谨条件下与SEQ ID NO.1中1-327位的核苷酸序列杂交。70％的同源基因可以通过突变试剂盒进行突变，或者通过插入，缺失等基因操作获得。较佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列，最佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中1-327位核苷酸序列编码具有SEQID NO.2所示的氨基酸序列。该序列是首次克隆，根据该序列可以设计引物，通过PCR或RT-PCR的方法大量扩增该核苷酸序列，连接于表达载体，生产杨树菇硫氧还蛋白。

本发明的另一个目的在于提供一种真菌硫氧还蛋白的多肽(SEQ ID NO.2)所示的氨基酸序列，该多肽具有多种活性：抗肿瘤活性，在医药上具有广泛的应用价值。

本发明还涉及一种杨树菇硫氧还蛋白多肽的制备方法，该方法是构建原核表达载体，利用亲和层析方法纯化杨树菇硫氧还蛋白，该方法简便，成本低廉。

本发明还涉及一种真菌硫氧还蛋白活性的多肽(SEQ ID NO.2)所示的氨基酸序列在作为制备治疗或预防宫颈癌、胃癌、乳腺癌、直肠癌、前列腺癌、肝癌等多种肿瘤疾病药物中的应用。它可以抑制多种肿瘤细胞的生长，杀死肿瘤细胞，对肿瘤细胞的抑制作用优于或类似于临床应用的化疗药物阿霉素效果，该硫氧还蛋白有开发成抗肿瘤药物的潜力。

为实现上述任务，本发明采用以下技术措施：