[发明专利]高效14价肺炎球菌结合疫苗

权利要求书

1、高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：是以分离提纯14种血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖与载体蛋白偶联结合后等量混合而成；所述的14种血清型肺炎球菌的血清型为1、2、4、5、6A、6B、7F、9N、9V、14、18C、19A、19F和23F；载体蛋白选用白喉菌素无毒变异蛋白CRM₁₉₇、破伤风毒素蛋白和流感嗜血杆菌D蛋白。

2、如权利要求1所示的，高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：所述的荚膜多糖与载体蛋白偶联结合是用1-氨基-4-二甲基-吡啶-四氟化硼和三乙胺活化，通过异脲键连接结合。

3、如权利要求2所示的，高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：所述的荚膜多糖与载体蛋白偶联结合的具体步骤是：在10ml浓度为10mg/ml的14种血清型肺炎球菌的荚膜多糖中分别加入用1ml乙腈溶解的浓度为100mg/ml1-氨基-4-二甲基-吡啶-四氟化硼，1min后加入4ml浓度为0.2mol/L的三乙胺活化，2.5min后加入5g载体蛋白，室温下反应1小时，4℃再反应10～15小时，加入乙醇胺终止反应，再经Sepharose CL-4B层析介质纯化，以波长A₂₀₆及A₂₈₀同步监测，氯化钠溶液洗脱，收集两波长重叠峰处的洗脱液即为结合疫苗。

4、如权利要求2所示的，高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：所述的血清型6A、6B、14、19A、19F和23F型分离提纯的荚膜多糖采用1-氨基-4-二甲基-吡啶-四氟化硼和三乙胺活化，通过异脲键偶联流感嗜血杆菌D蛋白。

5、如权利要求2所示的，高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：所述的血清型1、2及7F型分离提纯的荚膜多糖采用1-氨基-4-二甲基-吡啶-四氟化硼和三乙胺活化，通过异脲键偶联破伤风类毒素蛋白。

6、如权利要求2所示的，高效14价肺炎球菌结合疫苗，其特征在于：所述的血清型4、5、9N、9V和18C型分离提纯的荚膜多糖采用1-氨基-4-二甲基-吡啶-四氟化硼和三乙胺活化，通过异脲键偶联白喉毒素无毒变异蛋白。