[发明专利]人抗粘病毒蛋白A-hMxA的单克隆抗体及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人抗粘病毒蛋白A-hMxA的单克隆抗体的制备及其应用，具体涉及人抗粘病毒蛋白A-hMxA的单克隆抗体，以及在胞外分泌该抗体的杂交瘤细胞株；本发明还涉及应用该单克隆抗体检测人hMxA基因蛋白表达水平的多种免疫学方法。

背景技术

人抗粘病毒蛋白A-hMxA(human myxovirus resistance A)是由人I型干扰素(IFNα/β)特异性诱导表达并具有抗多种病毒活性的三磷酸鸟苷水解酶蛋白，该蛋白在体内多种细胞或组织中通过IFNα/β等I型干扰素的诱导可高效表达，同时人机体在一些病毒感染或注射了I型干扰素的情况下，可以直接通过人外周血单个核细胞PBMCs(peripheral blood mononuclear cells)样本检测出该蛋白的高效表达，上述的细胞IFNα/β的体外诱导也可检测其高效表达。现有报道表明人的III型干扰素亦可诱导该蛋白表达但其诱导表达水平远低于I型干扰素。更有意义的是：尽管一些病毒感染后可诱导该蛋白的表达，但该诱导表达方式是间接的必须通过激活I型干扰素介导的方式才能诱导该蛋白的表达。

尽管国内外已有IFNα/β抗体制备并建立了检测方法(主要是ELISA检测方法)，但IFNα/β基因是典型的诱导型表达基因，其蛋白含量极低且半衰期很短，因而在体内很难掌握测定该蛋白的最佳时机，而改用干扰素诱导的下游基因ISGs(Interferon Stimulation Genes)如人hMxA的表达情况(主要是考虑到这些基因表达蛋白非常稳定)作为替代(surrogate)指标来分析IFNα/β基因在体内被激活的状态具有极其重要的意义。

作为I类干扰素诱导的主要蛋白之一，hMxA的表达水平可作为I型干扰素活性的重要分子指标是有可靠理论依据的：(1)该蛋白非常稳定，(2)其表达水平严格与I型干扰素呈浓度依赖性(dose dependancy)。已有大量报道表明该基因仅受I型和III型干扰素的调控而不受II型干扰素的调节，而干扰素特别I和III型干扰素信号通路的激活与机体的病毒感染有很强的相关性，通过人hMxA基因转录水平特别是蛋白表达水平变化的分析在对小儿的细菌和病毒感染之间的鉴别诊断中有重要意义，为在临床中正确指导抗小儿病原体感染用药提供重要的指标。

同时，该蛋白作为人体先天性免疫系统中的重要功能蛋白之一，大量试验表明：该蛋白有抗多种RNA病毒的活性，主要包括正粘病毒，副粘病毒，本雅病毒。近十年来，有报道表明该蛋白具有抗乙型肝炎病毒的活性，同时研究发现：在一些慢性活动性乙肝患者中，I型干扰素治疗效果不佳与I型干扰素选择性失去的诱导人hMxA活性有密切的相关性，因此人hMxA基因的转录水平和蛋白表达水平可成为评判I型干扰素对慢性活动性乙肝患者治疗效果的重要指标，为此国内上海交通大学瑞金医院申报了用于检测乙肝患者样本中的人hMxA基因转录水平(mRNA)定量测定试剂盒专利(参见：申请号为CN200410093480.7的专利申请文件)。该试剂盒主要是利用荧光标记实时定量PCR法原理而设计，利用该试剂盒检测患者样本不仅需要纯化样本中的RNA，还需要定量PCR仪等高级仪器，其操作比较复杂且技术和设备要求高，因而在中小医院中的推广应用有一定的难度；同时该试剂盒测定的是人hMxA基因的mRNA转录水平，而该基因本身为诱导型基因，转录本的半衰期很短，利用该试剂盒同样存在如何掌握测定的最佳时机的问题。

不仅如此，本实验室还利用该单抗对数例乙型肝炎表面抗原疫苗受免健康者的PBMCs样本检测还发现：在免疫期内，正常人的PBMCs样本中的MxA基因均高表达，因此，如果可以得到特异性高、亲和力高、应用范围广的抗人hMxA单克隆抗体，则该单抗有望成为：检测乙型肝炎表面抗原疫苗免疫效果重要的辅助指标。

更有意义的是：国外相关学者以丙型肝炎病毒(HCV)和艾滋病毒(HIV)感染者为对象，研究二种病毒感染后的I型干扰素激活系统和I型干扰素信号通路时，发现这二种病毒感染与hMxA基因表达水平的改变存在很强的相关性，因此该基因非常有望成为主要的分子标记(Molecular Marker)来分析上述感染者的病程。