[发明专利]有外来氨基酸插入的PCV2 ORF2病毒样颗粒

说明书

相关申请

本申请要求2007年12月31日提交的临时申请61/017,863的优先权权益，在此通过述及将其教导和内容收入本文。

序列表

本申请含有计算机可读格式的序列表，通过述及将其教导和内容收入本文。

发明领域

本申请关注2型猪圆环病毒(PCV2)病毒样颗粒作为载体用于表达期望氨基酸序列的用途。更具体的说，本申请关注此类载体用于表达病原体的免疫原性氨基酸序列的用途及后续如此表达的免疫原性氨基酸序列在免疫原性组合物中的用途。还要更具体的说，本申请关注来自PCV2的可读框2(ORF2)作为载体用于表达期望氨基酸序列的用途。甚至更具体的说，本申请关注将外来氨基酸序列插入PCV2 ORF2及后续在表达系统中表达ORF2序列和外来氨基酸序列。还要更具体的说，本申请关注如此表达的序列在免疫原性组合物中的用途。

发明背景

猪圆环病毒2(PCV2)可读ORF2基因能在昆虫细胞培养物中表达。还已经显示了PCV2ORF2蛋白质有可能装配成病毒样颗粒(VLP)。这些VLP本质上是空的PCV2壳体，而且是高度免疫原性的。将有关肽区域融合至病毒样颗粒的最早描述可能在1986年(Delpeyroux et al.1986.A poliovirus neutralization epitope expressed on hybrid hepatitis B surface antigen particles.Science.Jul 25；233(4762)：472-5(通过述及将其教导和内容收入本文))。

已经显示了针对CSL 30聚物(CSL 30-mer)的单克隆抗体(3E2)在小鼠中经被动免疫疗法提供一些针对隐孢子虫感染的效能。环孢子配体(CSL)是30个氨基酸(30聚物)的免疫原性蛋白质序列。已经确定了单克隆抗体3E2识别来自CSL的N端30个氨基酸内的表位。30聚物的蛋白质序列为AINGGGATLPQKLYLTPNVLTAGFAPYIGV(SEQ ID NO.1)。此CSL 30聚物的肽可通过化学合成来生成，然后在疫苗制备中使用以在疫苗接种的动物中诱导抗体应答。通过用与佐剂组合的化学合成的CSL肽免疫，有可能生成抗CSL 30聚物免疫应答。然而，在商业性疫苗中使用化学合成的CSL肽的成本非常高。

流感病毒分成三种类型，称作A、B和C。A和B型流感病毒对几乎每个冬天发生的呼吸道疾病流行负有责任，而且常常与住院率和死亡率升高有关。A型流感病毒基于两种称作血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的病毒蛋白的差异分成亚型。流感病毒基质1(也称作M1)是装配和出芽所必需的至关重要蛋白质。HA和NA与流感病毒M1相互作用；HA经其胞质尾和跨膜域与M1结合。M2蛋白在流感病毒的复制循环中是至关重要的，而且还是病毒包膜的必需成分，因为它有形成高度选择性的、受pH调节的、传导质子的通道的能力。M2通道容许质子进入病毒的内部，而酸化削弱M1蛋白与核糖核酸核心的相互作用。

流感病毒M2蛋白质是在收到病毒感染的细胞上丰富的四聚体、III型跨膜蛋白。M2e是A型流感病毒M2蛋白的外部域。人A型流感病毒M2e序列只有23-24个氨基酸长，而且贯穿众多流行和两次重大大范围流行的发生保持几乎不变。值得注意的是，虽然最近几年出现了多种A型猪流感株，但是A型猪流感病毒的M2e区也保持相对不变。由于M2e区靶序列在A型流感病毒株中的保守性质，认为M2e是流感疫苗的“通用”抗原。24聚物M2e靶区序列的一种优选氨基酸序列为MSLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD(SEQ ID NO.6)(在本文中也称作M2ael)。此A型流感M2e区24聚物的肽可通过化学合成来生成，然后在疫苗制备中使用以在疫苗接种的动物中诱导抗体应答。通过用与佐剂组合的化学合成的M2e肽免疫，有可能生成抗A型流感M2e 24聚物免疫应答。然而，在商业性疫苗中使用化学合成的M2e肽的成本非常高。

尚未提出使用PCV2 ORF2的病毒样颗粒特性作为系统或机械来表达氨基酸序列或蛋白质，更不用说与PCV2 ORF2无关的或对于PCV2 ORF2而言外来的氨基酸序列或蛋白质。因而，尚未提出使用PCV2 ORF2的病毒样颗粒特性作为载体来生成免疫学有关肽，包括代表性例子30聚物CSL肽或24聚物A型流感M2e肽，及后续在免疫原性组合物或疫苗中使用此类肽。

发明概述