[发明专利]诺孕酯作为TRPC3、TRPC6和TRPC7离子通道选择性抑制剂的用途

说明书

发明领域

本发明涉及诺孕酯作为TRPC3/6/7离子通道亚家族成员的选择性抑制剂的用途，其能够药理学区分所述亚家族成员和其他TRPC亚家族成员。本发明还涉及诺孕酯在细胞模型、组织或动物模型中鉴定、表征和调节TRPC离子通道的用途。

发明背景

TRPC通道是在人体组织中广泛表达的非特异性阳离子通道(Montell2005)。它们首次在果蝇(Drosophila)TRP的哺乳动物同源物中被发现(Wes等，1995，Zhu等，1995)。被称为TRPC1-7的7个蛋白构成典型的(或经典的)最接近原型果蝇TRP的TRP亚家族(30-40％同一性，Okuhara等，2007)。

基于氨基酸序列同源性、组织分布和功能相似性，TRPC可以细分成四组(Clapham等，2001；Montell，2001)。作为TRPC家族中独特的部分，TRPC1和TRPC2本身各构成一个亚家族，而TRPC4和-5则合并，就像TRPC3、-6和-7一样。密切相关的TRPC3、TRPC6和TRPC7通道有着共同的活化机制，二酰甘油已被确定为其内源性配体(DAG)(Hofmann等，1999；Okada等，1999)。

根据世界卫生组织，在2005年全球有30％的死亡是由各种心血管疾病引起的。因此，对能预防和治疗心血管疾病的新药物有巨大的医疗需求。TRPC通道被认为是包括心肌病、血管重塑、高血压和高内皮通透性等一些心血管病变的新药开发的重要的药理学靶点(Dietrich等，2007)。

但迄今为止，还存在许多关于其天然组成和活化机制、生理功能及其在病理生理和疾病中的作用等悬而未决的问题。由于它们广泛而且部分重叠的分布、潜在的杂多聚化、相似的电生理特性、缺乏明确追踪这些通道的化合物工具，原位鉴定天然TRPC通道是复杂的(Moran等，2004)。

已知TRPC有机抑制剂如2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)(Xu等，2005)，SKF 96365(Boulay等，1997；Zhu等，1998)和BTP2(He等，2005)，以及无机阻断剂如Gd³⁺和La³⁺都没有足够有效性和特异性(Li等，2004)。

在转基因小鼠中的研究已经证明对解开某些TRPC可能的生理学功能有重要价值(Freichel等，2001)。但是这些模型系统不能为7个哺乳动物TRPC通道中的每一个存在，到目前为止，其生成和分析是消耗时间和成本的，并且它们也有局限性，因为它们容易受到密切相关通道的补偿效应(Dietrich等，2005c)。

因此，本发明的目的是开发一种新的药理学工具，能够在TRPC亚家族之间和内部有所区分。从而能够阐明在生理和病理生理条件下不同通道的作用。

根据本发明，这是通过用诺孕酯选择性抑制TRPC3、TRPC6和TRPC7实现的。因而，诺孕酯能够药理学区分属于不同TRPC亚家族的通道。此外，诺孕酯不会干扰在许多细胞中介导TRPC通道活化的普通G蛋白偶联受体、Gq、磷脂酶Cβ通路。这些特性使得诺孕酯成为鉴定和调节TRPC3、TRPC6和TRPC7的优选工具。

发明概述

本发明的一个主题是针对诺孕酯作为TRPC离子通道的选择性抑制剂的用途。通过诺孕酯被选择性抑制的TRPC离子通道优选为TRPC3、TRPC6或TRPC7。诺孕酯可用于在体外和体内选择性抑制TRPC离子通道。

特别的，诺孕酯对TRPC3/6/7亚家族成员的有效力至少是对TRPC4/5亚家族成员的4倍(图1和2)。诺孕酯对TRPC3/6/7亚家族成员与对TRPC4/5亚家族成员相比4倍的有效力是通过荧光测量、并且基于10μM诺孕酯计算出的抑制作用测定的。

这些荧光测量通过全细胞形态中膜片钳记录的方法进行例示性验证(图3)。

作为一种TRPC3，TRPC6和TRPC7的选择性抑制剂，诺孕酯可用作一种药理学工具，能够表征属于不同TRPC亚家族的通道，区分TRPC3/6/7亚家族成员和其他TRPC离子通道亚家族成员(图1，2和3)。

作为这样一种抑制剂，诺孕酯可进一步用作一种开发和验证测定法的工具化合物，以测量有关离子通道的活性。这种测定法的一个实例如图1所示。

本发明的另一个主题是针对在生理和病生理条件下，诺孕酯对TRPC3/6/7亚家族成员和TRPC4/5亚家族成员各自进行通道功能的示差分析的用途。这个可以像实施例中描述的那样做到。该分析可以在细胞、组织或动物中进行。动物可为啮齿动物，优选为小鼠或大鼠。