[发明专利]牙的制造方法及由该方法得到的牙

说明书

技术领域

本发明涉及牙的制造方法及由该方法得到的牙。

背景技术

牙是具有最外层为牙釉质、其内层为象牙质的硬组织，进而在象牙质的内侧具有产生象牙质的牙本质细胞、进一步在中心部具有牙髓的器官。另外，牙有时因龋齿或牙周病等而失去，牙的有无严重影响外观和对食物的味觉，并且从维持健康和维持高品质生活的观点出发，正在开发各种牙的再生技术。

例如，J.Dent.Res.，2002，Vol.81(10)，pp.695-700中公开了下述内容，将从牙胚分离的上皮细胞或间充质的牙囊细胞等细胞与生物体吸收性的载体一起移植到大鼠的腹腔内，由此再生牙样组织。

作为牙胚的再生方法，例如日本特开2004-331557号公报中记载了在纤维芽细胞增殖因子等生理活性物质的存在下培养由生物体分离的牙胚细胞。另外，日本特开2004-357567号公报中提出了将从生物体分离的牙胚细胞与能分化上述细胞的细胞中的至少一种与含有纤维蛋白的载体一起培养的方案，此处，含有纤维蛋白的载体使用牙胚的目标形状的载体，形成具有特定形态的“牙”。

另一方面，从再生医疗的观点出发，着眼于至今被废弃的生物体试样的再利用。特别是根据疾病等的不同切取的组织不同，生产时成为废弃对象的脐带或羊膜等组织作为能参与干细胞的存在或细胞分化的器官而受到关注。

作为着眼于该羊膜的技术，例如日本特开2006-6249号公报中公开了使来自羊膜的上皮细胞或间质细胞在未分化的情况下大量增殖的技术。通过该方法增殖的细胞具有类似于未分化的胚性干细胞的多分化能力，因此，对于再生医疗等是有用的。

另外，日本特开2004-253682号公报中记载了由人羊膜间充质细胞层及人羊膜上皮细胞层分离侧群细胞(side population cell)作为干细胞。记载了该细胞至少能分化为神经细胞，作为由神经细胞产生的物质的供给源是有用的。

发明内容

但是，再生的牙或牙胚起组织的作用时，构成组织的多种细胞必须配置于适当的相对位置(细胞配置)。即使简单使用羊膜，也难以提供作为组织而有效的牙。

因此，本发明的目的在于提供羊膜的新用途，同时提供制造保持了特有的细胞配置的牙的牙。

本发明是鉴于上述情况得到的，提供牙的制造方法及使用该方法得到的牙。

本发明的第一方案在于提供牙的制造方法，其包括下述步骤：使下述第1细胞集合体和下述第2细胞集合体按照不发生混合而密接的方式配置于支撑载体的内部，所述第1细胞集合体实质上仅包含来自羊膜的间充质细胞及上皮细胞中的任意一方，所述第2细胞集合体实质上仅包含所述来自羊膜的间充质细胞及上皮细胞中的任意另一方；

在所述支撑载体的内部培养所述第1及第2细胞集合体。

本发明的第二方案提供由上述制造方法得到的牙。

根据本发明，可以提供羊膜的新用途，同时可以提供保持了特有的细胞配置的牙。

附图说明

[图1A]是概念地表示本发明实施例的使用来自牙胚的间充质细胞和上皮细胞的牙胚再构筑顺序的图，表示细胞配置前的凝胶微滴(gel drop)的情况图。

[图1B]是概念地表示本发明实施例的使用来自牙胚的间充质细胞和上皮细胞的牙胚再构筑顺序的图，是表示将第一细胞集合体配置于凝胶微滴内的情况图。

[图1C]是概念地表示本发明实施例的使用来自牙胚的间充质细胞和上皮细胞的牙胚再构筑顺序的图，是表示将第二细胞集合体配置于凝胶微滴内的情况图。

[图1D]是概念地表示本发明实施例的使用来自牙胚的间充质细胞和上皮细胞的牙胚再构筑顺序的图，是表示将配置有第一细胞集合体及第二细胞集合体的凝胶微滴固化的情况图。

[图2]是本发明实施例的再构成牙胚的器官培养后的HE染色像。图中的标尺表示25μm。

[图3]是重叠本发明实施例的再构成牙胚的器官培养后的荧光显微镜照片像与微分干涉显微镜像的图。图中的标尺表示100μm。

具体实施方式

本发明牙的制造方法包括下述工序：使下述第1细胞集合体和下述第2细胞集合体按照不发生混合而密接的方式配置于支撑载体的内部，所述第1细胞集合体实质上仅包含来自羊膜的间充质细胞及上皮细胞中的任意一方，所述第2细胞集合体实质上仅包含所述来自羊膜的间充质细胞及上皮细胞中的任意另一方(以下称为配置工序)；在所述支撑载体的内部培养所述第1及第2细胞集合体的工序(以下称为培养工序)。

上述制造方法中，优选所述羊膜来自羊膜致密层。