[发明专利]一种快速鉴定胚胎期小鼠性别的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鉴定胚胎期小鼠性别的 方法，特别是涉及鉴定胚胎期14.5天(E14.5d)至16天(E16d)小 鼠性别的方法。

背景技术

小鼠作为实验动物的理想模型，被广泛用于医学，生物，农业等 科研领域。而小鼠发育至胚胎期(尚未出生)14.5天左右的时候正是 性腺激素分泌高峰时期，也是神经系统发育高峰期，此时期是许多科 研取材用于与性腺激素调控相关的组织器官的研究以及与性腺激素 相关信号通路的研究等方向的关键时期。因此，这一时期胎鼠性别的 快速鉴定，对于科学研究具有重要意义。

目前，胎儿性别鉴定的分子生物学方法主要有核型分析法，PCR 法，X-连接酶检测法等。核型分析方法的准确率较高，但是鉴别时间 长，需要对细胞进行建系。PCR法简单，灵敏，但要保证准确率，通 常需要复合PCR的方法进行鉴定，也比较耗时。X-连接酶检测法使 用的染料对胚胎的存活不利，酶失活时间也不易确定。许多时候，科 研人员需将胎儿组织冷冻起来，先取部分样品借助分子生物学手段对 其性别进行鉴定，之后才能选择特定性别的样品进行实验研究。也有 研究人员，将性腺部位解剖后，通过生殖腺的内部早期发育特点判断 性别，但这样做需要有长期的实践经验，不适用于所有人。那么，如 果可以找到一种简单、快速而又直观的方法鉴定这一时期的胎鼠性 别，无疑可以给科学研究人员提供极大的方便，既可以大大提高实验 效率，保证实验的精确性，又能节省人力物力。

小鼠乳腺的发育最早起始于E11.5天，形似凸透镜，E16天后， 腺芽顶端生长迅速，形成萌芽并进一步向真皮层乃至乳脂垫延伸出乳 腺导管，并出现分叉。从乳腺组织雏形形成到乳腺导管形成之前的 E11.5～E16天这段发育时期称为乳腺发育早期的乳腺原基(mammary anlagen)时期(Robinson，2004；Veltmaat et al.2003)。在乳腺原基时期 的E14d～E16d，雌性小鼠和雄性小鼠的乳腺原基受雌激素和雄激素 的不同刺激，将经历不同的发育变化。雄性小鼠乳腺原基周围的间叶 组织表达雄激素受体(AR)，应答雄激素而诱导乳腺小芽发生退化。 雌性小鼠乳腺原基周围的间叶组织没有活跃的AR表达而不会受到影 响(Kratochwil&Schwartz 1976)。基于这个理论，发明人观察这一特 殊时期不同性别胎鼠乳腺原基的发育变化，意外发现通过观察乳腺原 基的方法可以快速区分胎鼠E14.5～E16天的性别，并通过分子生物学 方法对这一判断方法的准确率进行了统计，证明此方法简单可行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能快速准确的鉴定胚胎期14.5天至 胚胎期16天小鼠性别的方法，为科学实验研究提供方便。

本发明提供的快速鉴定胚胎期小鼠性别的方法，包括如下步骤： 取胚胎期14.5～16天的胎鼠，置于体视镜下，观察胎鼠第4、5对乳 腺，乳腺原基呈现为白色圆点的为雄性；乳腺原基呈现为与皮肤界限 模糊的圆晕的为雌性。雄性胎鼠乳腺原基呈现的白色圆点为针尖大 小，直径约为250～300μm，与周围皮肤颜色差异显著。雌性胎鼠的乳 腺原基则与周围皮肤界限不清晰，呈现出模糊的圆晕。在观察时体视 镜的放大倍数以0.8*10倍(8倍)为宜，并且使用外光源辅助观察。

当然，本领域技术人员应当理解，是否使用体视镜以及放大的倍数对 本申请没有实质的影响。

从子宫中取出胚胎，在观察前应当用PBS对胎鼠进行清洗，以 便提高观察效果。

此外，还可以进一步分离乳腺原基，观察乳腺原基的形态，中间 具有透明空腔的为雌性，没有透明空腔的为雄性。

经PCR验证表明，本发明方法通过乳腺原基的外观判断胎鼠的 性别是可靠的。在胚胎期第15～16天，其准确率可达到百分之百。本 发明方法为科学研究人员提供极大的方便，既可以大大提高实验效 率，保证实验的精确性，又能节省人力物力。

附图说明

图1是E15.5天胎鼠腹部体视镜拍摄外观图。E15.5天不同性别 胎鼠腹部中线两侧的第4，第5对乳腺已呈现明显差异。左边为雌性 胎鼠，箭头所示为雌性胎鼠乳腺原基(雌性乳腺原基呈圆晕状，与周 围皮肤颜色差别不明显)；右边为雄性胎鼠，箭头所示为雄性胎鼠乳 腺原基(雄性乳腺原基为白色圆点，与周围皮肤颜色差异显著)。