[发明专利]乳品抗生素快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其是食品安全检测领域。

背景技术

奶牛由于经常挤奶极易发生乳腺炎等疾病，注射抗生素是目前最直接有效的治疗手段。而给病牛注射药物后，分泌的牛奶中会有大量的抗生素残留。即使在停药后，牛奶中的抗生素含量仍会在一段时间内持续超标。如果长期饮用抗生素超标的奶，会使正常人被动接受、积累抗生素，造成人体生理紊乱，对抗生素产生耐药性。欧美各国多年前即立法禁止抗生素残留超限量的牛奶上市，抗生素含量达标已成为通用的国际化的原料奶收购标准。

目前乳品中抗生素残留的检测方法大致分为三类：生物测定法、理化分析法和免疫法。分别介绍如下：

1.微生物检测法

微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如Delvotest法、纸片法(PD)、TTC法、拭子法(STOP)等。Delvotest法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。

Delvotest法：其原理是在牛奶样品中加入嗜热芽胞菌，在64℃条件下培养2.5～3小时后会产酸，酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色。若牛奶样品中不含抗生素，培养后样品呈黄色；如样品中含有抗生素，嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸，指示剂将不变色。

TTC法：即氯化三苯基四氮唑法(tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛奶中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。其原理是嗜热链球菌在牛奶中生长时会将无色的2，3，5—氯化三苯基四氮唑(2，3，5-Triphenyltetrazolium Chloride，TTC)还原为红色的三苯甲瓒。当牛奶中存在抗生素等抗菌物质时，会抑制嗜热链球菌的生长，TTC则无法被还原。

微生物检测方法的优点是，设备、试剂成本低；可以检测广谱的抗生素。缺点是：1.时间长，通常需要等待3小时以上；2.显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，无法做出准确判断；3.操作复杂，要求操作人员需有一定专业知识且实验过程中要求严格遵守操作规程；4.检测容易受干扰，导致结果出现假阳性或假阴性。

2.理化检测法

理化检测方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等等，其中以高效液相色谱(HPLC)法最为常用。

高效液相色谱(HPLC)：是目前广泛应用的一种理化检测方法，利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应来测定其含量。它引入了气相色谱理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。几乎所有的化合物包括高极性/离子型待测物和大分子物质，均可用HPLC进行测定。检测过程一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高。

其它用于乳品抗生素残留检测的理化法还包括气相色谱法(GC)、高效薄层色谱(HPTLC)、超临界流体色谱(SFC)和毛细管区域电泳法(CZE)等。这些方法尽管在残留检测中不常用，但因其各自特有的性能，能弥补常用方法中不足之处。如GC有许多高灵敏、通用性或专一性强的检测器供选用，如氢焰离子化检测器(FID)、氯磷检测器(NPD)等，检测限可达μg/kg级；HPTLC的斑点原位扫描定量、定性和高效分离材料(Φ3～10μm)改变了常规TLC在灵敏度和重现性方面的不足，但保持了TLC的简便、快速和样品容量大的优点，可使用正相或反相板，分辨率几乎与HPLC相当，在抗生素残留的快速筛选性检5测方面应用广泛；SFC可弥补GC和HPLC的不足，方便地连接各种灵敏的检测器(MS，ECD等)；CZE是90年代以来研究最活跃的分析技术之一，兼有高压电泳的高速、高分辨和HPLC灵活、高效的优点。

理化法的优点是能进行定性、定量和药物鉴定，敏感性较高。缺点是但检测程序复杂，费用较高，需购买昂贵的检测设备，不适合小型检验室。

3.免疫法

免疫测定法(immunoassays，IAs)可分为酶联免疫法(EIA)、放免法(RIA)等，是利用抗体与抗原之间特异性的免疫反应进行定性或定量检测。目前在乳品抗生素检测领域较为常见的免疫检测法有ELISA法和金标层析法等。