[发明专利]灰树花子实体或菌丝体X组分多糖的提纯分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及了食用菌有效成分的提取分离方法，具体涉及了一种灰树花子实 体或菌丝体多糖组分的提取分离方法。

背景技术

灰树花(Polyporus frondosus)隶属于真菌门、担子菌亚门、非褶菌目、多 孔菌科、多孔菌属。灰树花是著名的食用、药用真菌，营养丰富，鲜美可口，是 “可食、可补、可药，周身是宝”的大型真菌。灰树花性平、味甘，可以用来治 疗小便不利、水肿、脚气、肝硬化腹水、糖尿病、高血压和肥胖症等疾病。

已知从灰树花菌属的菌丝体或子实体提取的由带有β-1，3-键连葡萄糖支链 的β-1，6-键连葡萄糖主链构成的或由带有β-1，6-键连葡萄糖支链的β-1，3- 键连葡萄糖主链构成的多糖具有抗癌活性。

包括下列步骤制备抗癌物质也是已知的，所述步骤为：用热水对灰树花，树 花菌司象耳兰(Grifola gigantea)(Tonbimai)或Laetiporus sulphureus(Masutake)进 行提取；减压浓缩提取液，用有机溶剂对浓缩液进行沉淀，对沉淀物进行透析以 除去低分子量的物质，并用亲脂有机溶剂提取杂质以从透析液中除去它们。

然而，以上描述的那些方法对于制备大量的药剂和从有限的资源来有效地制 备健康食品而言是不适合，因为这些方法的纯化步骤相当复杂，而且所得的产物 中含有抑制免疫增强活性的物质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是利用灰树花X组分多糖对乙醇醇沉浓度不同性 质，使得灰树花子实体或菌丝体X组分得到分级分离纯化，提供了一种有效的 提取X组分多糖的方法。

本发明实现灰树花子实体或菌丝体X组分多糖分级分离纯化的技术方案为：

将原料粉碎，热水提取，乙醇沉淀，加入络合物络合，酸洗，碱复溶sevag 法脱蛋白，乙醇沉淀，碱复溶，乙醇再次沉淀，离心，取上清液，继续加醇沉淀， 收集这次的醇沉物，醇洗，冷冻干燥，得到灰树花多糖。

本发明的分离纯化技术通过以下步骤得以实现：

A.粗多糖的提取

以灰树花子实体或菌丝体为原料，粉碎成细粉，加入10—40倍的水，热水 90—120℃提取1-6小时，离心，减压浓缩至浓缩液相对密度为1.02—1.15，缓慢 加入95％的乙醇至终浓度为30％--80％，搅匀，4℃静置过夜，过滤，沉淀于乙 醇中保存备用。

B.X组分多糖的分级醇沉纯化

(1)A中所得粗多糖挤干乙醇，用5-30倍的蒸馏水复溶；

(2)加入20％--100％的CTAOH至不再产生沉淀，调节PH≥10，4℃保持 24—72h，离心分离，弃上清液得沉淀；

(3)取上述(2)所得沉淀加入1-6倍的1-60％的醋酸溶液洗涤1-5遍，离 心，50％--95％的乙醇洗涤1-5遍，离心，所得沉淀用0.1—1M的NaOH溶液复 溶，离心，上清液用sevag法脱蛋白；

(4)将(3)中脱蛋白后的溶液加入乙醇使乙醇浓度为50％～70％，静置， 离心；取沉淀复溶后加入乙醇使乙醇浓度为30％～40％，静置，离心；取上清 液加入乙醇使乙醇浓度为70％～90％，静置，离心，收集沉淀物，用95％的乙 醇和无水乙醇洗涤，冷冻干燥，即得灰树花X组分多糖。

上述冷冻干燥的程序为：-47℃2h，-30℃4h，-5℃24h，27℃4h，真空度保持 在0.08MPa～0.09Mpa。

灰树花子实体或菌丝体X组分多糖的分级分离方法，其特征在于其中所述 的：

①X组分的多糖为能与CTA-基团集合的蛋白多糖，集合物不溶于水，其中糖 含量在80％左右，蛋白质含量6％--10％，分子量为25～45万道尔顿且具有良好 的降血脂作用。

②灰树花粗多糖脱蛋白后采用不同浓度的乙醇沉淀可以得到分子量不同的各 种多糖，灰树花X组分的醇沉方法及乙醇浓度为：灰树花粗多糖脱蛋白后加入乙 醇使乙醇浓度为50％～70％，静置，离心；取沉淀复溶后醇沉乙醇浓度为30％～ 40％，静置，离心；取上清液加入乙醇使乙醇浓度为70％～90％，静置，离心； 即得灰树花多糖X组分(分子量为25～45万道尔顿)